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文檔簡介
1、目的:卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展可能與雌激素及其受體相關(guān),雌激素受體β(Estrogen Receptorbeta,ERβ)為近些年來備受關(guān)注的雌激素受體,在腫瘤中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(extrallular signal regulated protein kinase,ERK1/2)為調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖的重要通路,在促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。本研究利用體外實驗,研究ERβ與ERR1/2在
2、卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)及關(guān)系,旨在探討兩者在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為卵巢癌的早期診斷及治療提供了一定的實驗基礎(chǔ)。
方法:1.用不同濃度的17β-E2(10-10mol/L、10-8mol/L、10-6mol/L、10-4mol/L)分別培養(yǎng)細(xì)胞5min、15min、30min、60min、120min,MTT法檢測卵巢癌細(xì)胞增殖率,選擇17β-E2的最佳濃度和時間。
2.用ERβ激動劑DPN(0.01μ mol
3、/L)和ERK1/2抑制劑U0126(10μ mol/L)聯(lián)合17β-E2(10-6mol/L)分別處理細(xì)胞1h、6h,及單獨使用DPN(0.01μ mol/L和1μ mol/L)和U0126(10μ mol/L和20μ mol/L)分別處理細(xì)胞24h,用RT-PCR分別檢測ERβ mRNA、ERK1mRNA、ERK2mRNA的表達(dá),用蛋白免疫印記法檢測ERβ和p-ERK1/2蛋白表達(dá)。
結(jié)果:1.濃度分別為10-10mo
4、l/L、10-8mol/L、10-6mol/L、10-4mol/L的17β-E2作用細(xì)胞60min時,細(xì)胞的增值率分別為(4.9±0.2、5.1±0.2、5.7±0.23、3.3±0.23),均高于其他時間(5min,15min,30min,120min),p=0.000。時間為60 min時,17β-E2在濃度為10-6 mol/L,細(xì)胞增殖率最高(5.7±0.23),與其他濃度的細(xì)胞增殖率(4.9±0.2、5.1±0.2、3.3±0
5、.23)相比,p=0.000。得出17β-E2在濃度為10-6mol/L,時間為60 min時細(xì)胞增殖率最高。
2.用DPN、U0126處理細(xì)胞后,ERβ mRNA表達(dá)逐漸增高。ERK1mRNA、ERK2mRNA表達(dá)逐漸降低。ERβ蛋白表達(dá)逐漸增高。p-ERK1/2蛋白表達(dá)逐漸降低。
3.ERβ mRNA與ERK1/2mRNA的表達(dá)成負(fù)相關(guān),r=-0.886,r=-0.943(p<0.05)。ERβ蛋白與p-
6、ERK1/2蛋白表達(dá)為負(fù)相關(guān)r=-0.943,r=-0.829(p<0.05)。
結(jié)論:1.ERβ在卵巢癌細(xì)胞中低表達(dá),DPN及U0126均能促進(jìn)其表達(dá)。2.ERK1/2在卵巢癌細(xì)胞中高表達(dá),DPN及U0126均能抑制其表達(dá),故阻斷ERK1/2通路可作為治療惡性腫瘤的靶點。3.用DPN及U0126處理細(xì)胞后,ERβ表達(dá)增加的同時,ERK1/2表達(dá)降低,且兩者有相關(guān)性。表明ERβ與ERK1/2通路間可能存在一個交匯點,即ER
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