TRPA1介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)在機(jī)械通氣肺損傷中作用的研究.pdf

1、本課題通過建立大鼠VILI模型，研究TRPA1介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)在機(jī)械通氣肺損傷中作用，具體如下:
　　1.大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷(VILI)動物模型的建立SPF級雄性SD大鼠60只，實驗前禁食12h、自由飲水，隨機(jī)分組A對照組、B小潮氣量組、C大潮氣量組后，腹腔注射10％的水合氯醛3.5ml/kg麻醉，頸部正中切開置入氣管導(dǎo)管，除A組外，均接小動物呼吸機(jī)。腹主動脈放血處死大鼠，立即開胸，鉗加右主支氣管，收集左側(cè)肺組織，稱濕重

2、，置烤箱80℃干燥至恒重，測定不同組的肺濕/干重(W/D)。經(jīng)氣管灌入4％多聚甲醛以固定右側(cè)肺組織，石蠟切片HE染色后，觀察不同組肺組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果A對照組肺組織表面光滑，無出血;HE染色觀察肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，由單層肺泡上皮細(xì)胞構(gòu)成，肺泡內(nèi)無炎細(xì)胞浸潤、無出血等病理現(xiàn)象;B小潮氣量組肺泡內(nèi)無出血現(xiàn)象，但肺泡壁稍增厚，并伴有少量炎癥細(xì)胞出現(xiàn);C大潮氣量組肺表面有點狀出血，肺泡壁增厚，肺泡內(nèi)有輕到重度的炎細(xì)胞浸潤，并產(chǎn)生肺泡出

3、血、肺不張。所測定的數(shù)據(jù)與A組比較，B組W/D值無明顯變化，C組W/D值升高。與B組比較，C組W/D值升高。證明大潮氣量(40ml/kg)的機(jī)械通氣會導(dǎo)致大鼠肺組織損傷嚴(yán)重，可成功的建立呼吸機(jī)相關(guān)肺損傷大鼠動物模型。
　　2.TRPA1介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)參與VILI的研究SPF級雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為3組，每組20只:A正常對照組氣管切開自主呼吸4h;B小潮氣量組VT7ml/kg，RR40次/min，通氣4h;C大潮氣量

4、組VT40ml/kg，RR40次/min，通氣4h。B、C兩組收集BALF與右肺中上葉。經(jīng)測定:(1)與A組比較，B組(VT7ml/kg)與C組（VT40ml/kg）的WBC含量、肺灌洗液總蛋白含量、MPO活性、MDA含量上升(p＜0.01);而SOD活性只在大潮氣量組C組中顯著下降(p＜0.01)，在小潮氣量的B組則沒有明顯變化。(2)小潮氣量的B組與大潮氣量的C組TNF-α與IL-8指標(biāo)顯著上升(p＜0.01)。(3)小潮氣量的B組

5、與大潮氣量的C組SP指標(biāo)含量顯著上升(p＜0.01)，而與B組對比，C組的SP指標(biāo)也顯著上升(p＜0.01)。(4) RT-PCR結(jié)果顯示TRPA1在大鼠肺組織表達(dá)，且各個處理后，其表達(dá)量基本保持不變。因此，本研究認(rèn)為大潮氣量機(jī)械通氣導(dǎo)致大鼠肺組織損傷尤為明顯;TRPA1介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)參與了機(jī)械通氣性肺損傷，在VILI發(fā)生機(jī)制中其重要作用。TRPA1參與機(jī)械通氣性肺損傷的不是以表達(dá)量變化的方式參與，很有可能機(jī)械性通氣通過想象TR

6、PA1蛋白的活性參與了肺損傷。
　　3.拮抗劑對TRPA1介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)參與的VILI的影響SPF級雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組（10只/組）:A正常對照組氣管切開自主呼吸4h，B小潮氣量組VT7ml/kg，C大潮氣量組VT40ml/kg， D小潮氣量組VT7ml/kg+拮抗劑HC-030031， E大潮氣量組VT40ml/kg+拮抗劑HC-030031，各組RR40次/min，通氣4h。經(jīng)測定:1）與A組比較，大潮氣

7、量E組VT40ml/kg在有拮抗劑HC-030031添加的情況下，WBC含量、肺灌洗液中總蛋白、MPO活性、MDA含量比未添加的C組顯著性降低，SOD活性比未添加的C組提高;小潮氣量D組VT7ml/kg即便添加拮抗劑HC-030031，以上指標(biāo)基本保持不變;2）大潮氣量并添加拮抗劑E組的TNF-α與IL-8含量分別存在不同程度的降低趨勢;3）添加了拮抗劑的E組SP指標(biāo)含量下降。因此，TRPA1拮抗劑HC-030031有效的改善肺部組織的