整合素β1、蛋白激酶C與膠質瘤細胞骨架及侵襲性的實驗研究.pdf

1、目的 研究整合素(integrin)β1、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)與細胞骨架結構改變的關系及其對人腦膠質瘤細胞的生物學行為的影響。 方法 以U251膠質母細胞瘤(U251MG)細胞為研究模型，通過細胞粘附實驗、遷移實驗和體外侵襲實驗，檢測整合素β1及PKC對人惡性膠質瘤細胞粘附、遷移和侵襲能力的影響；通過免疫熒光化學染色結合激光共聚焦顯微鏡和掃描電鏡方法，觀察細胞微絲和膠質纖維酸性蛋

2、白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)等骨架蛋白數(shù)量、分布和細胞表面?zhèn)巫闱闆r，比較整合素β1、PKC對微絲、GFAP等骨架蛋白的影響。 結果 (1)PKC激活劑PMA增加U251MG細胞在FN上的粘附能力(P<0.05)，但PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體對細胞粘附能力無明顯影響。(2)PKC激活劑PMA增加U251MG細胞在FN的運動、遷移能力(P<0.01

3、)，PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體減弱U251MG細胞在FN上的運動、遷移能力(P<0.01)。(3)U251MG細胞內可見散在的微絲結構，在PKC激活劑PMA處理的細胞內，難以見到清晰的細胞微絲骨架，并常見大量絮團狀的F-ac- tin小體，但PMA對GFAP的表達和結構并無影響。PKC抑制劑Calphostin C使微絲沿細胞膜成簇狀排列，而抗整合素β1抗體可使細胞內F-actin微絲形成束狀纖維(應力纖維)

4、，粗壯而密集，且GFAP表達增強。(4)掃描電鏡觀察顯示，加人PMA后，U251細胞表面的偽足數(shù)量明顯增加，而PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體處理的細胞內，偽足數(shù)量明顯減少，甚至消失。(5)PMA可促進U251MG細胞的體外侵襲能力(P<0.01)，Calphostin C及抗整合素β1抗體可減弱此作用(P<0.01)。 結論 (1)整合素β1與FN協(xié)同作用，可通過激活PKC信號通路，改變U251M