胃腸道神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中P16和nm-23H1基因表達(dá)的研究.pdf

1、山東醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文胃腸道神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中P16和nm-23H1基因表達(dá)的研究姓名：蔡毅然申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理解剖學(xué)指導(dǎo)教師：劉洪琪20000601材料和方法1 ．標(biāo)本來源山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院1 9 9 0 年手術(shù)切除、病理確診為胃腸道腺癌2 6 5 例。全部標(biāo)本均為常規(guī)1 0 ％甲醛固定，石蠟包埋，作4u m 厚切片。2 ．免疫組化方法2 ．1 抗體來源：嗜鉻素h ( C g A ) 、n m - 2 3 H 1 及S A

2、 ] 3 C 試劑盒均為博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。2 ．2 染色方法：應(yīng)用S h B C 法( 鏈霉親和素一生物素酶復(fù)合物法)①4 “m 厚石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化。②3 ％H 2 0 2 滅活內(nèi)源性過氧化物酶。③微波抗原修復(fù)，9 8 o C 2 0m i n 。④抗原修復(fù)液室溫1 0 m i n ，蒸餾水洗2 m i n x3 次。⑤正常山羊血清封閉2 0 m i n 。⑥滴加1 ：8 0 稀釋的一抗，4 。c 冰箱過夜，

3、0 ，0 1 MP B S 沖洗2 m i n X3 次。⑦滴加生物素化山羊抗小鼠I g G ，3 6 。C 溫箱3 0 m i n ，0 ．0 1 MP B S 沖洗2 m i n ×3 次。⑧滴加S A B C 液，3 6 。C 溫箱3 0 m i n ，0 ．0 1 MP B S 沖洗5 m i n ×4 次。⑨D A B 顯色，顯微鏡下控制染色時(shí)間。⑩蘇木素輕度復(fù)染之后，逐級(jí)乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。2