CD147在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達模式及其影響機制初探.pdf

1、目的：胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(GEP-NENs)是最常見的NENs類型，近年來其發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。但其發(fā)生機制不清，且缺乏有效的診斷和治療標志物。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，CD147在正常胰島中不表達，在絕大部分胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(pNENs)中表達，且隨著腫瘤惡性程度的增高，CD147的表達水平增高。提示CD147可能參與了pNENs的腫瘤發(fā)生，且表現(xiàn)為促癌作用，但對CD147在胃腸NENs中的表達情況，在pNENs中的作用及其機制，以及

2、在正常胰島中不表達的分子機制尚需進一步研究。因此本研究主要包括以下幾個部分：CD147抗體驗證;檢測CD147在胃腸NENs中的表達表達研究;檢測CD147、MCT-1、MCT-4慢性胰腺炎中的表達，MCT-1、MCT-4、PDX1、nkx6.1、Pax-6在pNENs中的表達并分析其與CD147表達的相關(guān)性研究;pNENs中CD147基因的序列變異研究。
　　方法：1.構(gòu)建CD147真核過表達載體，轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，提取蛋

3、白行去糖基化處理后，CD147抗體和抗His抗體進行western blot驗證。若CD147抗體和抗His(C端)抗體能得到同樣分子量的融合蛋白目的條帶，證明抗體識別的是CD147分子。
　　2.采用免疫組化方法檢測109例胃腸NENs中CD147的表達，檢測36例慢性胰腺炎中CD147、MCT-1、MCT-4的表達，及42例pNENs中MCT-1、MCT-4、PDX1、nkx6.1、Pax-6的表達，并與CD147表達進行相關(guān)

4、性分析。
　　3.選取29例pNENs患者的正常組織和腫瘤組織配對石蠟樣本共60個，對CD147基因進行測序檢測。
　　結(jié)果：第一部分 CD147抗體驗證：證實前期實驗所用CD147單克隆抗體特異性識別地為CD147分子，抗體可用。
　　第二部分 CD147在胃腸NENs中的表達研究：1.CD147在胃、十二指腸、結(jié)直腸NENs中均有表達，免疫表型可表現(xiàn)為漿型、膜型、膜漿型，其陽性表達率分別為65.7％、76.5％、1

5、9.3％。2.CD147在胃腸NENs中的表達水平與組織學分級呈顯著正相關(guān)，在胃NENs中CD147的免疫表型與其表達水平有關(guān)，表達水平越高，膜型的比例越高。
　　第三部分 CD147、MCT-1、MCT-4在慢性胰腺炎及pNENs瘤旁正常胰島中表達的研究：CD147、MCT-1、MCT-4在36例慢性胰腺炎中的胰島中均呈陰性表達。42例pNENs病例中，MCT-1、MCT-4在瘤旁正常腺泡和導(dǎo)管及正常胰島中均呈陰性表達。

6、　　第四部分 MCT-1、MCT-4、PDX1、nkx6.1、Pax-6在pNENs中的表達及其與CD147表達的相關(guān)性研究：1.MCT-1、MCT-4、Pax-6、nkx6.1、PDX1在pNENs中均呈陽性表達。2.MCT-1、MCT-4的表達水平與腫瘤的大小、組織學分級、pTNM分期呈顯著正相關(guān)，而Pax-6、nkx6.1、PDX1的表達水平與腫瘤的大小、組織學分級、pTNM分期呈顯著負相關(guān)。3.發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移的腫瘤中的

7、MCT-1、MCT-4表達水平要高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移的;而未發(fā)生局部浸潤和/或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤中Pax-6的表達水平比發(fā)生局部浸潤和/或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高，無遠處轉(zhuǎn)移的比有遠處轉(zhuǎn)移的腫瘤Pax-6、PDX1表達水平高。4.CD147與MCT-1的表達水平呈顯著正相關(guān)，與MCT-4的表達水平無相關(guān)性，CD147與PDX1、nkx6.1、Pax-6的表達水平呈顯著負相關(guān)。
　　第五部分 pNENs中CD147基因的序列變異研究：

8、29例pNENs患者的60個組織樣本中共檢測出47個CD147基因變異位點。其中直徑＞2cm的腫瘤中19：580388C＞G(rs2229664)CG雜合基因型、19：582775A＞G GG純合基因型、19：582927T＞A(rs8259)AA純合基因型型比≦2cm的多，差異有統(tǒng)計學意義。19：579627C＞T(rs1803202)在腫瘤組織或正常與腫瘤組織同時存在的T純合基因型比C/T雜合基因型多，差異有統(tǒng)計學意義。19：582

9、927T＞A在正常組織和腫瘤組織中的變異（AA基因型和A/T雜合基因型）在不同的腫瘤組織學分級間存在顯著差異，組織學分級越高，腫瘤組織中存在的19：582927T＞A變異(AA基因型和A/T雜合基因型)越多。
　　結(jié)論：1.CD147在GEP-NENs不同部位中的表達有所差異。
　　2.CD147在胃腸NENs中的表達水平與組織學分級呈顯著正相關(guān)，其表達水平高可能提示腫瘤的分化差、惡性程度高，可能能作為評估胃腸NENs嚴重程

10、度的一個指標。
　　3.CD147、MCT-1、MCT-4在慢性胰腺炎和pNENs瘤旁胰島中均呈陰性表達。
　　4.MCT-1、MCT-4的表達水平與腫瘤的大小、組織學分級、pTNM分期呈顯著正相關(guān);Pax-6、nkx6.1、PDX1的表達水平與腫瘤的大小、組織學分級、pTNM分期呈顯著負相關(guān)，其表達水平高可能能提示腫瘤的分化好、惡性程度低。
　　5.pNENs中CD147與MCT-1的表達水平呈顯著正相關(guān)，與PDX1