Reg Ⅳ在炎癥性腸病的表達(dá)及其對(duì)病變活動(dòng)度的預(yù)測(cè)作用.pdf

1、背景和目的：
　　 炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一組病因未明的非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’sdisease,CD)。近二十余年來(lái),隨著人們生活方式的變化和診斷水平的提高,國(guó)內(nèi)炎癥性腸病的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。疾病是處于活動(dòng)期還是靜止期直接關(guān)系到疾病的正確治療。IBD臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變,診斷缺乏特異性的

2、指標(biāo),而且常因?qū)Σ∏榛顒?dòng)的判斷不準(zhǔn)確而延誤治療。目前臨床評(píng)價(jià) IBD 活動(dòng)與否主要通過(guò)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)、內(nèi)鏡下的表現(xiàn)及病理等綜合判斷。其中 C-反應(yīng)蛋白(CRP)幾乎全部由肝臟產(chǎn)生,短時(shí)間內(nèi)(數(shù)小時(shí))即可升高,而機(jī)體一旦恢復(fù),CRP 又迅速恢復(fù)正常(6～7d)。CRP 可及時(shí)而敏感地反映炎癥活動(dòng),是目前臨床最為推崇的IBD活動(dòng)性指標(biāo)之一。另外,各國(guó)專家針對(duì)IBD制定出疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index),

3、對(duì)疾病的活動(dòng)性進(jìn)行量化處理,從而更客觀準(zhǔn)確地反映疾病的活動(dòng)性,幫助臨床醫(yī)師作出正確的醫(yī)療決策。評(píng)價(jià) UC 活動(dòng)度常采用Southerland 疾病活動(dòng)指數(shù),也稱 Mayo 指數(shù),較為簡(jiǎn)單實(shí)用,包括腹瀉、便血、粘膜表現(xiàn)、醫(yī)師評(píng)估病情幾個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)。Best的CDAI 計(jì)算法是國(guó)際上廣泛應(yīng)用于臨床和科研的評(píng)價(jià) CD 活動(dòng)度的指標(biāo)。根據(jù)腹痛、腹瀉、腹塊等8個(gè)變量,通過(guò) 1 周觀察計(jì)分,乘以規(guī)定的權(quán)重,求得各自分值,再計(jì)算積分。但少數(shù)患者尤其是某

4、些早期和復(fù)發(fā)患者,血生化表現(xiàn)不顯著,而且在疾病活動(dòng)的早期內(nèi)鏡也不能發(fā)現(xiàn)。有必要尋找新指標(biāo)以更全面、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià) IBD的炎癥活動(dòng)度,為臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
　　 再生基因(regenerating gene,Reg)家族屬鈣依賴的植物血凝素超家族,主要在肝、胰和胃腸道發(fā)揮作用,是一組分泌性蛋白,與糖尿病、組織損傷、炎癥、腫瘤尤其是消化道腫瘤密切相關(guān)。根據(jù)Reg基因編碼蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu),Reg家族可分為四個(gè)亞型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。R

5、eg Ⅳ 最早由 Hartupee 于2001首次從炎癥性腸病病人中分離。Reg Ⅳ 在正常人的胃腸道即有低表達(dá),包括結(jié)腸、小腸、胃和胰腺。另外在結(jié)腸、膽囊、前列腺及胃等腫瘤組織中均可發(fā)現(xiàn) Reg Ⅳ表達(dá)顯著升高。目前關(guān)于 Reg Ⅳ的研究多集中其與胃腸道腫瘤的關(guān)系,研究表明RegⅣ起到了促增殖和抗凋亡的作用,但是在IBD中的具體表達(dá)及其在炎癥性腸病中的機(jī)制尚不清楚；炎癥性腸病中 Reg Ⅳ與炎癥指標(biāo)如 C 反應(yīng)蛋白及疾病活動(dòng)度的關(guān)系仍

6、有待研究。因此我們運(yùn)用免疫組化分析Reg Ⅳ 在UC、CD 及正常人腸粘膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況。并進(jìn)一步研究了RegⅣ表達(dá)與CRP、CDAI、Mayo指數(shù)的關(guān)系；以明確Reg Ⅳ是否可作為評(píng)價(jià)IBD活動(dòng)度的新的指標(biāo)。
　　 方法
　　 1 臨床取材 收集了 2008 年1月-2010年1月在我院消化內(nèi)科門(mén)診和住院的IBD患者病變部位腸粘膜活檢標(biāo)本61例,其中CD23例,UC38 例。同時(shí)還另外收集了25例健康體檢者的腸粘

7、膜標(biāo)本。所有檢查對(duì)象在征求同意后,行結(jié)腸鏡或雙氣囊小腸鏡檢查并取活檢,所有IBD患者的病例資料至少由兩位消化?？漆t(yī)師重新復(fù)習(xí)病史和資料,統(tǒng)一按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病學(xué)科組制定的診斷指南進(jìn)行診斷,并經(jīng)組織病理學(xué)活檢得到確診。健康體檢者的腸粘膜標(biāo)本取自排除顯著器質(zhì)性病變且腸鏡下診斷為正常腸道的健康體檢者。同時(shí)采集了所有研究對(duì)象的血常規(guī)及生化指標(biāo)。IBD的活動(dòng)度主要參考 CDAI(Crohn's disease activity

8、index)和Mayo 指數(shù)(也稱作 Southerland DAI)。
　　 2 免疫組織化學(xué):采用免疫組化方法檢測(cè) RegⅣ在IBD組及健康體檢組中的蛋白表達(dá)情況。由兩名病理科醫(yī)師在不知道臨床資料的情況下獨(dú)立判定免疫組化染色的結(jié)果。染色結(jié)果綜合染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)兩個(gè)方面進(jìn)行半定量分析。
　　 3 病情分期 潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病均根據(jù)臨床資料分為活動(dòng)期和緩解期。評(píng)價(jià) UC 活動(dòng)度采用 Mayo 指數(shù),也稱作So

9、utherland 疾病活動(dòng)指數(shù),較為簡(jiǎn)單實(shí)用,包括腹瀉、便血、粘膜表現(xiàn)、醫(yī)師評(píng)估病情幾個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo),求得每例患者的分值。評(píng)價(jià) CD的活動(dòng)度采用 Best的CDAI計(jì)算法[1]。根據(jù)腹痛、腹瀉、腹塊等8個(gè)變量,通過(guò)1周觀察計(jì)分,乘以規(guī)定的權(quán)重,求得各自分值,再計(jì)算積分。
　　 4 病理學(xué)診斷 所有活檢標(biāo)本均送南方醫(yī)院病理科進(jìn)行處理由兩名資深病理醫(yī)生進(jìn)行分析。病理論斷標(biāo)準(zhǔn)主要參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病協(xié)作組于2007年制定

10、的我國(guó)炎癥性腸病診斷規(guī)范的共識(shí)意見(jiàn)。
　　 5 RT-PCR 檢測(cè) RegⅣ mRNA 水平 采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè) IBD 患者及健康體檢者中的mRNA 表達(dá)情況。
　　 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示,RegⅣ表達(dá)情況在IBD及健康對(duì)照者之間的比較、RegⅣ表達(dá)情況在UC及CD中的比較、Reg Ⅳ表達(dá)情況在活動(dòng)期及緩解期 UC 中的比較,Reg Ⅳ表達(dá)情況在UC及健康對(duì)照

11、者中的比較、Reg Ⅳ表達(dá)情況在活動(dòng)期CD及緩解期CD中的比較均采用 Mann-WhitneyU 法。多組之間比較采用 One-Way ANOVA 檢驗(yàn)。CRP 與 CDAI、Mayo 指數(shù)相關(guān)性采用 Pearson 相關(guān)分析。所有的統(tǒng)計(jì)結(jié)果以 P<0.05 作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；參數(shù)比較前均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn),在符合正態(tài)分布和方差齊性的基礎(chǔ)上進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果
　　 1.RegⅣ 在IBD病人及健康人中的表達(dá)

12、情況
　　 我們通過(guò)免疫組化檢查觀察炎癥性腸病病人及健康查體者腸粘膜中 Reg Ⅳ表達(dá)情況。免疫組化結(jié)果顯示RegⅣ 蛋白主要著色于腸粘膜上皮細(xì)胞的胞漿。在健康查體者中 Reg Ⅳ的表達(dá)情況是:未表達(dá)(0 例),弱表達(dá)(19 例,76％),中度表達(dá)(4 例,16％),強(qiáng)表達(dá)(2例,8％)。在IBD 患者中,未表達(dá)(0 例),弱表達(dá)(17 例,27.9％),中度表達(dá)(17例,27.9％),強(qiáng)表達(dá)(27 例,44.2％)。
　

13、　 Reg Ⅳ 在炎癥性腸病病人腸粘膜中的表達(dá)較健康查體者顯著增加(P<0.05)。CD 與 UC 病人Reg Ⅳ的表達(dá)沒(méi)有顯著差異(P=0.503)。通過(guò)比較活動(dòng)期 UC 病人較非活動(dòng)期 UC,我們發(fā)現(xiàn)前者腸粘膜 Reg Ⅳ表達(dá)顯著增加(P<0.05)。而非活動(dòng)期 UC 病人與健康查體者之間Reg Ⅳ的表達(dá)沒(méi)有顯著差異(P=0.406)。CD 無(wú)論活動(dòng)與否,其Reg Ⅳ的表達(dá)量差異不大(P=0.515)。
　　 RT-PCR

14、 結(jié)果提示活動(dòng)期 UC 中 RegⅣ 在mRNA水平明顯高于緩解期及健康人,而活動(dòng)期與緩解期 CD 中 RegⅣ在mRNA水平均高于健康人。RT-PCR與免疫組化具有較好的一致性。
　　 2.Reg Ⅳ表達(dá)與IBD病人活動(dòng)程度及 C 反應(yīng)蛋白之間的關(guān)系
　　 接下來(lái)我們研究了 Reg Ⅳ表達(dá)水平與血清CRP濃度之間的關(guān)系。在UC病人中,血清CRP濃度隨著 Reg Ⅳ表達(dá)的增強(qiáng)而升高(P<0.05):Reg Ⅳ 在弱表達(dá)的

15、病人 CRP 為5.59±4.59mg/l,中度表達(dá)時(shí) CRP 為13.73±10.86mg/l,而強(qiáng)表達(dá)時(shí),CRP 為88.33±47.99mg/l。而在 CD 病人中,不同Reg Ⅳ表達(dá)水平病人所對(duì)應(yīng)的CRP 濃度并無(wú)顯著差異(P=0.455),分別為弱表達(dá):18.844±20.60 mg/l),中度表達(dá):43.66±34.24mg/l,強(qiáng)表達(dá) 41.90±41.48mg/l。
　　 同時(shí),我們研究了 Reg Ⅳ 與炎癥性腸

16、病活動(dòng)度之間的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)在RegⅣ 不同染色強(qiáng)度中 Mayo 指數(shù)分別為:弱表達(dá)4.58±1.88,中度表達(dá) 6.20±1.32,強(qiáng)表達(dá) 8.06±2.38?？梢?jiàn),在 UC 患者中,Mayo指數(shù)隨著Reg Ⅳ表達(dá)的增強(qiáng)而升高。(P<0.05)。在CD病人中,Reg Ⅳ不同染色強(qiáng)度中 CDAI 指數(shù)分別為:弱表達(dá) 148.40±38.12,中度表達(dá)179.14±64.87,強(qiáng)表達(dá)241.36±136.95,可見(jiàn),不同 Reg Ⅳ表達(dá)水

17、平所對(duì)應(yīng)的CDAI 指數(shù)并無(wú)顯著差異(P=0.226)。CRP 濃度與UC及CD的炎癥活動(dòng)度指數(shù)均呈正相關(guān):Mayo指數(shù)(r=0.627.,P<0.05),CDAI(r=0.624,P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1、在正常人中,已有低水平的RegⅣ表達(dá),而IBD可伴有Reg Ⅳ表達(dá)水平的顯著增加?；顒?dòng)期UC較緩解期的UCReg Ⅳ的表達(dá)增強(qiáng)；而CD無(wú)論活動(dòng)與否,其RegⅣ的表達(dá)量差異不大。
　　 2、在UC