去勢雄兔干眼模型淚腺上皮細胞凋亡和相關(guān)基因表達及局部雄激素治療效果的觀察.pdf

1、本研究目的是觀察去勢雄兔淚液分泌、淚膜穩(wěn)定性變化、淚腺細胞凋亡及相關(guān)基因表達和局部應(yīng)用雄激素治療效果的觀察。 研究方法：取白色健康成年雄性家兔18只(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院動物實驗中心提供)體重(2.0±0.5kg)，隨機分為正常對照組(正常組)、干眼對照組(干眼組)、干眼治療組(治療組)。制作12只去勢雄兔(24只眼)干眼模型。[7] 干眼組和治療組分別于去勢前、去勢后1、2、3、4、6、8、12周行schirmer試驗

2、，淚膜破裂時間(break-uptime,BUT)及虎紅染色檢測。同時治療組在去勢4周后雙眼點3％的睪酮[8]一日四次，一次一滴。三組分別利用全自動酶免發(fā)光分析儀檢測術(shù)前術(shù)后血清睪酮水平。12周后處死三組兔，取其淚腺、結(jié)膜、角膜及角膜緣組織行病理組織學(xué)觀察，常規(guī)石蠟包理、切片，然后分別進行光鏡、TUNEL法及免疫組織化學(xué)研究。 研究結(jié)果： 1.淚液分泌及淚膜穩(wěn)定性的檢查結(jié)果。 1.1正常組和干眼組、治療組在去勢3

3、周后，淚液浸濕試紙的長度、淚膜破裂時間的差異有顯著性(F=6.37P＜0.05；F=6.24P＜0.05)。干眼組、治療組在實驗6周后，治療組淚液浸濕試紙長度高于干眼組，淚膜破裂時間長于干眼組，兩者差異均有顯著性(t=13.27p＜0.01；t=10.031P＜0.01)。 1.2.虎紅染色正常組為陰性。3周后干眼組、治療組為弱陽性。8周后治療組為弱陽性，干眼組為強陽性。 1.3.干眼組、治療組去勢后血清睪酮明顯低于正常

4、組(F=26.2P＜0.01)。12周后兩實驗組血清睪酮水平無明顯差異。(T=0.98P＞0.05) 2.組織病理學(xué)觀察干眼組淚腺可見邊界清晰而規(guī)則的腺泡細胞，腺上皮細胞小而密集，胞漿萎縮扁平，腺泡腔擴大，PAS染色陽性物質(zhì)減少；結(jié)膜杯狀細胞數(shù)量減少，結(jié)膜上皮細胞排列不規(guī)則，均可見大量淋巴細胞浸潤；角膜上皮不完整，細胞核變小。治療組淚腺上皮近高柱狀，核居基底部，腺腔內(nèi)可見較多的泡狀粘液，PAS染色陽性物質(zhì)較干眼組明顯多；結(jié)膜杯狀

5、細胞數(shù)量較干眼組多，上皮細胞排列較規(guī)則，淋巴細胞減少；角膜上皮完整。 3.形態(tài)學(xué)觀察干眼組去勢后毛發(fā)粗糙，結(jié)膜和瞼緣炎癥明顯，角膜干燥無光澤。4只眼可見灰白色角膜潰瘍。治療組結(jié)膜和瞼緣炎癥較輕，未發(fā)現(xiàn)角膜潰瘍。 4.淚腺細胞凋亡及相關(guān)基因表達正常組和干眼組、治療組淚腺腺泡和導(dǎo)管上皮細胞凋亡平均每高倍視野數(shù)差異性顯著(F=34.5P＜0.05)，Q檢驗結(jié)果治療組和正常組沒有統(tǒng)計學(xué)意義。治療組和干眼組淚腺上皮細胞凋亡平均每高

6、倍視野數(shù)差異有極顯著性(T=5.46P＜0.01)。干眼組淚腺導(dǎo)管及腺泡上皮細胞中可見大量Fas、FasL蛋白陽性表達，F(xiàn)as、FasL陽性目標平均光密度值(OD)[0.241±0.0330.260±0.025]均明顯高于正常組(0.157±0.01160.162±0.027)。治療組淚腺導(dǎo)管及腺泡上皮細胞中Fas、FasL蛋白陽性表達較干眼組少，陽性目標平均光密度值(OD)[0.1639±0.1660.174±0.035]。三組數(shù)據(jù)經(jīng)

7、統(tǒng)計學(xué)檢驗差異有顯著性(F=52.48P＜0.01；F=48.97P＜0.01)。12周后，干眼組和治療組Fas、FasL陽性目標平均光密度值(OD)有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.026p＜0.05；t=9.054p＜0.05)；淚腺腺泡和導(dǎo)管上皮細胞中Fas、FasL蛋白陽性平均光密度值與細胞凋亡數(shù)都成正相關(guān)。(r=0.825p＜0.01；r=0.790p＜0.01) 研究結(jié)論： 1.去勢后雄兔睪酮水平明顯低下是造成干眼的原因

8、之一。 2.去勢雄兔通過組織學(xué)觀察可見淚腺上皮細胞萎縮、腺泡粘液物質(zhì)減少及結(jié)膜杯狀細胞減少，淚腺及結(jié)膜可見大量淋巴細胞浸潤，導(dǎo)致淚液分泌質(zhì)和量的改變及淚膜穩(wěn)定性的改變。 3.雄激素為免疫抑制劑，有類激素樣作用。 4.雄激素能夠抑制淚腺及結(jié)膜炎癥，雄激素水平的高低與干眼癥的淚腺細胞凋亡和炎癥之間有密切的關(guān)系。 5.局部雄激素治療對雄激素水平低下干眼治療有效且對全身雄激素水平無明顯影響。 6.細胞凋亡