胡椒堿對胰島素抵抗模型的干預(yù)研究.pdf

1、目的：本課題前期研究成果證明，蓽茇醇提物能夠改善高糖高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗(Insulin Resistance，IR)大鼠模型的空腹血糖水平和口服葡萄糖耐量等反映胰島素抵抗水平的指標(biāo)。在前期研究基礎(chǔ)上，本研究課題以蓽茇中的主要活性成份胡椒堿(piperine，PIP)和胰島素抵抗細(xì)胞模型常用的3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對象，進(jìn)行了以下幾方面的研究：鑒定3T3-L1脂肪細(xì)胞和建立3T3-L1胰島素抵抗脂肪細(xì)胞模型；探索胡椒堿對3T3-

2、L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的干預(yù)作用，以及可能參與其中的相關(guān)因子的變化。
　　 方法：⑴采用分步誘導(dǎo)分化的方法，使正常3T3-L1脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，并通過檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(triglyceride，TG)含量對其成熟進(jìn)行鑒定。用地塞米松(dexamethasone，DEX)誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗，通過測定不同細(xì)胞的葡萄糖(glucose，GLU)消耗量對模型的建立進(jìn)行判斷。⑵MTT法分析胡椒堿對正常3

3、T3-L1細(xì)胞增殖的影響;用皮質(zhì)激素刺激方法建立3T3-L1脂肪細(xì)胞IR模型，觀察胡椒堿和陽性藥(羅格列酮和AICAR)對發(fā)生IR的脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗量和游離脂肪酸(FFA)含量的影響，比較胡椒堿與陽性藥對胰島素抵抗的改善作用。⑶用酶聯(lián)免疫法檢測細(xì)胞內(nèi)的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)[14,15]、乙酰輔酶A羧化酶合成酶(ACC)水平[16-22];用高效液相檢測細(xì)胞內(nèi)一磷酸腺苷與三磷酸腺苷比值(AMP/ATP)[23-26]

4、，觀察胡椒堿是否通過影響AMPK通路發(fā)揮改善胰島素抵抗的作用。
　　 結(jié)果：①油紅O可使經(jīng)誘導(dǎo)分化的3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)的“戒環(huán)”狀脂滴染成紅色;同時(shí)檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平，分化組明顯高于正常對照組。1μM地塞米松誘導(dǎo)24h、48h、72h，與正常對照組比較均能降低葡萄糖的消耗量。選擇1μM地塞米松誘導(dǎo)48h作用為建立IR模型的最佳時(shí)間。②胡椒堿3T3-L1脂肪細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50為118.3μM，PIP濃度在15μM以

5、下對細(xì)胞增殖沒有太多影響;胡椒堿在5μM～50μM濃度范圍內(nèi)能顯著增加IR模型細(xì)胞對葡萄糖的消耗量，對IR模型改善作用的半數(shù)有效濃度EC50為6.3μM;與模型組比較，胡椒堿、羅格列酮(ROG)和AICAR均能顯著增加IR模型細(xì)胞對葡萄糖的消耗量，其中胡椒堿50μM時(shí)效果最為明顯(P＜0.001);與模型組比較胡椒堿、ROG和AICAR均能使IR模型細(xì)胞內(nèi)的FFA水平下降（P＜0.05）。③與模型組比較，胡椒堿、ROG和AICAR組細(xì)胞

6、內(nèi)的pAMPK水平明顯升高，ACC水平明顯降低;與ROG組和AICAR組比較，胡椒堿組內(nèi)pAMPK水平在24h無差異，48h時(shí)低于ROG和AICAR組，ACC水平無差異。與模型組比較，胡椒堿、ROG組細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP比值明顯升高，AICAR組細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP比值無差異;胡椒堿組細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP比值略低于ROG組。
　　 結(jié)論：胰島素抵抗通常會導(dǎo)致脂肪細(xì)胞的糖消耗能力下降，并使其產(chǎn)生更多的游離脂肪酸，而游離脂肪酸的脂毒