MMP-9-TIMP-1在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織中的表達及纈沙坦、氟伐他汀的干預效應.pdf

1、目的： 1)觀察慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡樣腎炎模型小鼠腎組織中MMP-9/TIMP-1的表達； 2)觀察纈沙坦、氟伐他汀是否通過影響MMP-9、TIMP-1表達及減少尿蛋白從而改善狼瘡腎炎。 方法： 模型建立參照文獻。將cGVHD狼瘡樣腎炎模型小鼠隨機分為模型組(B組)、纈沙坦組(C組)和氟伐他汀組(D組)，每組6只，另取6只正常同齡雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1雜交鼠為對照組(A組

2、)。小鼠首次注射淋巴細胞第2周起每日灌胃給藥，每2周收集尿液一次，12周后處死。尿蛋白量檢測采用雙縮脲法測定法；MMP-9,TIMP-1蛋白檢測采用免疫組織化學方法；MMP-9,TIMP-1 mRNA表達檢測采用RT-PCR；MMP-9活性采用明膠酶譜法。 結果： 1)B、C、D組小鼠24小時尿蛋白量均顯著高于A組小鼠(P<0.01)；C、D兩組小鼠24小時尿蛋白量均低于B組小鼠(P<0.05)。 2)腎組織HE

3、染色：B組小鼠腎小球彌漫性腫脹增大或萎縮硬化，腎小球細胞顯著增生，炎癥細胞浸潤，腎小管變性、萎縮，可見管型，腎間質炎癥細胞浸潤；C及D組上述病理改變較B組明顯減輕，腎小球細胞增生減輕，腎間質炎癥細胞浸潤減少。 3)免疫組織化學檢測：B、C、D組小鼠MMP-9蛋白主要表達于腎小球、腎小管及間質血管壁上，B組表達量顯著高于C、D組，A組小鼠僅在少數腎小管上皮細胞有微弱表達；B、C、D組小鼠TIMP-1蛋白主要表達于腎小管，B組表達量

4、顯著高于C、D組，A組小鼠僅在少數腎小管上皮細胞有微弱表達，半定量結果示：B、C、D組MMP-9、TIMP-1表達較A組顯著增加，且上述各值在C、D組中較在B組中顯著降低(P<0.01)，C、D組間沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 4)半定量RT-PCR檢測：B、C、D三組小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1mRNA表達均顯著高于A組小鼠(P<0.01)；且上述各值在C、D組中較在B組中顯著降低(P<0.01)，C、D組間沒有統(tǒng)計

5、學差異(P>0.05)。 5)SDS-PAGE明膠酶譜法檢測MMP-9表達活性：B、C、D組小鼠腎組織MMP-9表達活性較A組明顯增強；C、D組表達活性均較B組低。 6)MMP-9表達與腎小球細胞增殖的相關性：腎組織MMP-9表達與腎小球細胞增殖成顯著正相關(r=0.635，p=0.005)。 7)MMP-9/TIMP-1平衡關系：半定量免疫組織化學及RT-PCR檢測結果顯示B、C、D組小鼠腎組織中MMP-9/T

6、IMP-1比值均明顯高于A組小鼠兩者的比值，C、D組小鼠腎組織中MMP-9/TIMP-1比值均明顯低于B組小鼠兩者的比值(P<0.01)。 結論： 1)MMP-9在對照組小鼠腎組織中表達及活性較微弱；在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎小球及腎小管中表達明顯增加，以腎小管更為明顯；MMP-9活性顯著增強；且腎小球中MMP-9陽性表達與系膜細胞增生成正相關。TIMP-1在對照組小鼠腎組織中表達較微弱；在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎小

7、管中表達明顯增加。且24小時尿蛋白量較對照組小鼠顯著增多。因此MMP-9、TIMP-1表達及活性的異?？赡軈⑴cLN蛋白尿形成及其發(fā)病過程。 2)纈沙坦及氟伐他汀降低cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1表達及MMP-9活性，并降低尿蛋白量從而緩解LN，并降低尿蛋白量從而緩解LN，且兩種藥物在治療上無統(tǒng)計學差異。 3)cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1表達均異常增加，MMP-9/TIMP