夏枯草多糖的分離分析.pdf

1、夏枯草為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥果穗，因“此草夏至后即枯”得名。目前的研究表明夏枯草多糖有降壓及降血脂作用，抗菌、抗病毒作用，降糖作用，抗炎及免疫抑制作用，抗腫瘤作用。由于夏枯草有重要的臨床應用價值和開發(fā)利用價值，是一種有潛力的藥物資源，而越來越引起人們的關注。 本實驗以夏枯草為原料，針對目前夏枯草多糖的研究現狀，從以下幾方面展開研究工作： 1)采用90℃熱水提取，并對提取條件進行了優(yōu)化，得到夏枯草粗多糖，并經分級

2、醇沉得到幾個級分；然后測定了醇沉后的活性成分AEPS1中的硫酸基含量和蛋白質含量；經陰離子交換柱層析、凝膠柱層析對粗多糖AEPS1進行分級純化；通過高效凝膠過濾色譜測得了AEPS1的主要組分PLS3的重均分子量為8.3×10<'5>Da，并對PLS3進行了紅外分析和其比旋光度測定，得到了其初步結構。 2)對傳統(tǒng)苯酚硫酸法進行改進，在用苯酚-硫酸法測定多糖含量的過程中，考察了硫酸的加入方式和加入硫酸后的放置溫度對吸光度和靈敏度的影

3、響：隨著溫度的升高，兩條線趨于靠攏，在110℃時幾乎重合，確定最佳加入方式為垂直加入，加入硫酸搖晃后最佳油浴溫度為110℃。并按各多糖的單糖組成配置相應的混合標樣，根據相應的標準曲線測得夏枯草多糖和其純品PLS3的總糖含量，減小了誤差、提高了靈敏度。因此,改良后的苯酚硫酸法為糖含量的測定提供了更為有效的方法。并用改良的苯酚硫酸法測定了夏枯草粗多糖和PLs3的多糖含量分別為81.62％和85.33％。三次測定結果的相對標準偏差為0.56％

4、和0.34％。 3)建立了一種柱前對氨基苯甲酸(p-AMBA)衍生反相離子對色譜法同時分離檢測多糖中多種單糖及糖醛酸組成的方法，篩選出適合于p-AMBA糖衍生物分離的色譜柱，考察了柱溫、流動相組成等對10種單糖和兩種糖醛酸的p-AMBA衍生化產物的保留值及分離的影響，優(yōu)化了反應溫度和反應時間等衍生化條件。采用紫外檢測器時，方法的檢出限為(2.55～13.4)×10<'-7>mol/L;采用熒光檢測器時，方法的檢出限為(3.38～

5、176)×10<'-8>mol/L；并用建立的p-AMBA柱前衍生化高效液相色譜法測定了夏枯草粗多糖AEPS1和PLS3以及螺旋藻多糖的單糖組成，發(fā)現夏枯草粗多糖和其主成分PLS3兩者所含單糖種類一致，都為半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖，但兩種物質的單糖組成相對摩爾百分比有所差異。螺旋藻多糖含有Fruc、 Gal、 Glc、Man、Xyl、Ara、Rib、GalUA、Fuc、GlcUA及Rha，其摩爾比為：27.6：21

6、.9：371.3：2.2；12.2：5.6: 3.4; 4.6：4.2：1：4.8，比以往文獻中同時檢出的單糖和糖醛酸種類要多。以經典的氣相色譜法驗證結果顯示：新建立的對氨基苯甲酸衍生化法不僅結果可靠，而且有更高的靈敏度，能同時分離出的單糖種類較其他方法要多。 通過上述研究，建立了一種更好的測定夏枯草多糖的單糖組成的方法，并對夏枯草多糖的測定、波譜學行為進行必要的探討，為制定夏枯草藥品和保健品的質量標準奠定相應的基礎，為分析檢測