夏枯草黃酮類成分提取與分離純化技術研究.pdf

1、提取、分離純化中藥的有效成分是進行中藥研究的前提,也是中藥現(xiàn)代化研究的關鍵問題所在。傳統(tǒng)的提取分離技術如:煎煮法、浸漬法、滲漉法和柱色譜,存在著有效成分提取率不高、雜質(zhì)多、能耗高等缺點,不僅容易污染環(huán)境,而且所獲得的產(chǎn)品往往存在傳統(tǒng)中成藥“粗、大、黑”的缺點,療效也不穩(wěn)定。因此,發(fā)展新型提取及分離純化技術,建立中藥高效、快速、能耗低的提取及分離的技術體系,為開展藥理藥效等研究,解決中藥質(zhì)量和療效等關鍵問題提供技術支撐。鑒于此,本論文以夏

2、枯草為研究對象,通過分析超聲、微波、超臨界等提取方法對夏枯草黃酮類成分得率的影響,并應用高速逆流色譜分離技術進行分離,從而建立夏枯草有效成分的快速提取分離技術體系,同時為其他中藥資源進行類似研究提供參考。主要研究結果如下:1.采用超聲波提取技術建立了夏枯草黃酮類成分的提取技術體系。通過單因素實驗,分析了乙醇濃度、超聲時間、提取次數(shù)、料液比四個因素對黃酮得率的影響,單因素實驗結果表明:在其他條件一樣的情況下,50％乙醇濃度、20min的提

3、取時間、1:50的料液比以及提取次數(shù)5次所獲得黃酮得率最高;在此基礎上,通過正交實驗對實驗結果進一步優(yōu)化,得出超聲波提取夏枯草黃酮的最優(yōu)工藝即:以乙醇濃度60％為提取溶劑,在料液比1:40條件下提取25min提取次數(shù)4次。對優(yōu)化工藝條件進行了三次平行的驗證實驗,結果表明在此條件下黃酮得率分別4.18％,4.10％,4.21％,平均得率為4.16％,相對標準偏差RSD=1.36％。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,最后在優(yōu)化的條件下與

4、傳統(tǒng)的回流提取進行了比較,結果表明超聲波提取黃酮得率是回流提取法的3.68倍。
　　 2.應用微波提取技術建立了夏枯草黃酮類成分的提取工藝。在單因素實驗的基礎上,探討了乙醇濃度、微波作用時間、微波功率、料液比對黃酮得率的影響;單因素實驗結果表明:在其他條件一樣的情況下,50％乙醇濃度、提取時間8min、料液比1:50和300W的微波功率所獲得黃酮得率最高:然后運用正交實驗設計對結果進一步優(yōu)化,確定了微波提取夏枯草黃酮的優(yōu)化工藝條

5、件即以70％乙醇做為提取劑,料液比為1:40,在微波功率200W條件下提取10min。在此工藝條件下進行了三次驗證實驗,結果三次得率分別為8.61％,8.73％,8.69％平均得率為8.67％,相對標準偏差RSD=0.70％,差異較小,說明工藝可行。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,還與傳統(tǒng)回流提取法以及超聲波法進行了比較,結果表明微波法分別是超聲波法和回流法的2.08倍、7.67倍。
　　 3.應用超臨界CO2流體萃取技術

6、建立了夏枯草黃酮類成分的提取工藝技術體系。首先研究了溫度、壓力、時間、90％乙醇夾帶劑用量對黃酮得率的影響;單因素實驗結果表明:在其他條件一樣的情況下,萃取溫度50℃、萃取時間3h、萃取壓力40Mpa、夾帶劑用量4.5ml/g所獲得黃酮得率最高:然后采用正交實驗優(yōu)化實驗結果,得到超臨界法提取夏枯草黃酮的優(yōu)化工藝條件,在此工藝條件下進行了三次驗證實驗,并與傳統(tǒng)提取方法、微波法、超聲波法做了比較。研究結果表明:超臨界流體萃取法提取夏枯草黃酮

7、的優(yōu)化工藝條件為:萃取溫度40℃,萃取壓力40Mea,萃取時間2.5h,夾帶劑用量4ml/g。為了考察這些方法與傳統(tǒng)方法的提取效率,還在優(yōu)化條件下與傳統(tǒng)提取方法做了比較,研究結果還表明:超聲波和微波法提取效果優(yōu)于超臨界流體萃取法,分別是它的1.07倍、2.23倍,但超臨界提取效果優(yōu)于傳統(tǒng)的回流提取法,是它的的3.43倍。
　　 4.應用高速逆流色譜技術建立了夏枯草黃酮類成分的分離技術體系。首先考察了溫度、流速、轉速對峰的分離度和

8、固定相保留率的影響;然后,根據(jù)分離效果初步篩選了氯仿-甲醇-水(6:8:4,v/v)做為夏枯草黃酮類成分分離洗脫體系;在此基礎上,考察了不同的進樣量以及不同的洗脫方式對分離效果的影響,優(yōu)化了分離的溶劑體系;優(yōu)化后的分離體系:以氯仿-甲醇-水(6:8:4,v/v)做為初始洗脫體系上相做固定相,下相做流動相,流速2.0mL/min;主機轉速800rpm;工作溫度30℃;檢測波長;254nm;進樣量80mg進行洗脫,第170,min換用氯仿-