藍莓中黃酮類物質(zhì)的提取、分離純化及生物活性研究.pdf

1、本文以藍莓果實為原料，研究花色苷和黃酮醇的提取及分離純化方法，并對純化后的花色苷和黃酮醇樣品進行結(jié)構(gòu)鑒定及活性研究，為充分開發(fā)利用這一資源提供了科學依據(jù)。利用超聲波輔助法提取藍莓中的花色苷和黃酮醇，采用響應面試驗設計對試驗條件進行優(yōu)化，確定該方法的最佳條件：超聲功率512.7W，超聲時間29.8min，液料比為9.5:1 mL/g。此條件下的理論預測黃酮醇提取量為0.804mg/g，花色苷提取量為2.899mg/g。驗證試驗條件：超聲功

2、率510W，超聲時間30min，液料比10:1mL/g，黃酮提取量為0.806mg/g，花色苷提取量為2.903mg/g，與預測值比較吻合。在分離純化工藝中，采用中壓柱層析法，依次選擇大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20為柱填料，對藍莓中的花色苷和黃酮醇粗提液分別進行分離純化。通過靜態(tài)試驗比較了六種大孔吸附樹脂對花色苷的吸附及解吸效果，篩選出D101為最佳樹脂。用D101大孔吸附樹脂中壓柱層析法研究動態(tài)試驗，得到最佳純化條件為：選

3、擇上樣液濃度為0.073mg/mL，上樣體積10mL，流速5mL/min，80％乙醇溶液為洗脫液，此條件下的花色苷回收率為96.61％，大孔樹脂純化前花色苷粗提液純度為5.53％，純化后樣品純度為75.58％；通過靜態(tài)試驗比較七種大孔吸附樹脂對黃酮醇吸附及解吸效果，篩選出S-8為吸附和解析性能均較佳的樹脂。用S-8大孔吸附樹脂中壓柱層析法研究動態(tài)試驗，得到最佳純化條件為：選擇上樣濃度0.362mg/mL，上樣體積10mL，流速2mL/m

4、in，95％乙醇溶液為洗脫液，此條件下的回收率為92.83％，大孔樹脂純化前黃酮粗提液純度為5.03%，純化后樣品純度為55.58％。
　　 本文采用Sephadex LH-20中壓柱層析法對大孔樹脂純化后的花色苷進行精細分離，得到最佳分離條件為：上樣濃度為1.0mg/mL，上樣體積10mL，20％、35％、50％甲醇梯度洗脫，20％甲醇時，流速1.0mL/min；35％甲醇，50％甲醇時，流速3.0mL/min，分離得到較單一

5、的兩種組分，其中對組分Ⅰ進行鑒定為矢車菊-3-葡萄糖苷，HPLC測定純度90.88％。Sephadex LH-20中壓柱層析法對大孔樹脂純化后的黃酮醇進行精細分離，得到最佳分離條件為：上樣濃度1.0mg/mL，上樣體積10mL，流速1mL/min，50％、70％、無水甲醇梯度洗脫，分離得到較單一的兩種組分，其中對組分Ⅰ進行鑒定為槲皮素，HPLC測定純度89.10％，組分Ⅱ初步判定可能為楊梅酮。從反應的三個階段進行研究藍莓花色苷的抗非酶糖