血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌病遺傳易感性研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMs，簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥）和子宮腺肌?。╝denomyosis，簡(jiǎn)稱腺肌?。┦菋D科常見病和多發(fā)病，是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用而引起的多基因遺傳疾病。內(nèi)異癥和腺肌病是引起育齡期婦女盆腔疼痛和不孕的重要原因，盡管有多種治療方法，但效果并不令人滿意。究其原因，是此類疾病的病因?qū)W和發(fā)病機(jī)理尚不明確。現(xiàn)在被普遍接受的觀點(diǎn)為內(nèi)異癥是由于經(jīng)血逆流所致，而腺肌病是由于子宮肌壁的防御屏障遭到破壞使子宮內(nèi)膜得以

2、侵入所致，但無論子宮內(nèi)膜細(xì)胞異位到子宮體以外還是子宮肌層，這種異位的內(nèi)膜細(xì)胞想要存活并發(fā)展為內(nèi)異癥或腺肌病，一個(gè)必要條件是血管生成。在已知的血管生成因子中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是生理性及病理性血管生成的最重要調(diào)節(jié)物，它可直接而特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致新生血管形成。人類的VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)存在一些多態(tài)性位點(diǎn)，這些多態(tài)性位點(diǎn)可能通過改變基因的轉(zhuǎn)錄活性而影響

3、蛋白的表達(dá)，導(dǎo)致了人類對(duì)疾病易感性的個(gè)體差異。研究表明VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A、-460C/T單核苷酸多態(tài)（single nucleotide polymorphisms，SNPs）與多種疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。本研究旨在探討 VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A、-460C/T SNPs與子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，進(jìn)一步闡明子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌病的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：本研究采用病例-對(duì)照研

4、究方法，收集344例內(nèi)異癥患者和360例健康對(duì)照個(gè)體、174例腺肌病患者和199例健康對(duì)照個(gè)體的靜脈抗凝血各5ml，同時(shí)記錄其病史和個(gè)人及家族相關(guān)資料。采用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析方法檢測(cè)VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-11

5、54G/A、-460C/T基因多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率分布。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5版軟件包（SPSS Company，Chicago，Illinois，USA）進(jìn)行。病例組與對(duì)照組的年齡差異行t檢驗(yàn)。比較各位點(diǎn)基因型頻率的觀察值與預(yù)期值并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)行Hardy-Weinberg平衡分析。兩組間的基因型分布比較采用行×列表X2檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比（odds ratio，OR

6、）及95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）。采用EH軟件和2LD軟件分別分析VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-460C/T，-1154 G/A2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的單倍型頻率和等位基因連鎖不平衡狀態(tài)。P<0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.內(nèi)異癥和腺肌病組患者的年齡、初潮年齡、孕次和產(chǎn)次與其對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。健康對(duì)照組中VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A、-460

7、C/T兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)基因型頻率分布均符合Hardy-weinberg平衡（P>0.05）。
　　 2.VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-460C/T多態(tài)C、T等位基因頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為22.7％、77.3％和20.6％、79.4％，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；C/C、C/T、T/T基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為3.8％、37.8％、58.4％和4.7％、31.7％、63.6％，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；

8、與C/T+T/T基因型相比，T/T基因型與內(nèi)異癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，OR值為0.80（95％CI=0.59～1.09）。
　　 3.在腺肌病組和對(duì)照組中，VEG-F基因啟動(dòng)子區(qū)-460C/T多態(tài)的C、T等位基因頻率分別為20.7％、79.3％和22.1％、77.9％，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；C/C、C/T、T/T基因型頻率分別為4.0％、33.3％、62.6％和6.0％、32.2％、61.8％，兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義（P>0.05）；與C/T+T/T基因型相比，T/T基因型與內(nèi)異癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，OR值為1.04（95％CI=0.68～1.58）。
　　 4.在內(nèi)異癥組和對(duì)照組中，VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A多態(tài)的三種基因型頻率（A/A、G/A、G/G）分別是1.7％、28.8％、69.5％和5.8％、32.8％、61.4％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）；等位基因頻率分布（G、A）分別是83.9％、16.1％和77

10、.8％、22.2％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）；與G/A+A/A基因型相比，攜帶G/G基因型可能明顯增加內(nèi)異癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.43，95％CI=1.05～1.96）。
　　 5.在腺肌病組和對(duì)照組中，VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A多態(tài)的三種基因型頻率（A/A、G/A、G/G）分別是2.9％、23.6％、73.6％和7.0％、34.2％、58.8％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007）；等位基因頻

11、率分布（G、A）分別是14.7％、85.3％和24.1％、75.9％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）；與G/A+A/A基因型相比，攜帶G/G基因型可能明顯增加腺肌病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.95，95％CI=1.26～3.03）。
　　 6.VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A和-460C/T SNPs位點(diǎn)間不存在連鎖不平衡（D'=0.34）。
　　 結(jié)論：
　　 1.VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)-1154G/A