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1、目的:有文獻(xiàn)報(bào)道釩化合物通過(guò)影響多種酶的活性,從而具有了抗癌的作用。本文旨在研究四聚釩酸鹽VO3(分子式O13V4)對(duì)糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAcT2活性的影響,及釩的抗腫瘤作用是否與糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAcT2相關(guān)。通過(guò)向HL-60細(xì)胞加入不同濃度的偏釩酸鈉及抑制ppGalNAcT2的表達(dá),觀察HL-60細(xì)胞增殖和細(xì)胞之間粘附性的改變,初步判斷釩抗腫瘤作用與ppGalNAc—T2的相關(guān)性。 方法:用分子動(dòng)力學(xué)模擬軟件包對(duì)ppG
2、alNAcT2進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬。分子對(duì)接軟件把VO3與ppGalNAcT2的活性中心進(jìn)行分子對(duì)接,并進(jìn)對(duì)對(duì)接產(chǎn)物進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬以進(jìn)一步驗(yàn)證分子對(duì)接的結(jié)果。在人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60中加入不同濃度的偏釩酸鈉,MTT比色法觀察對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,半定量RT—PCR法檢測(cè)在不同濃度偏釩酸鈉作用下ppGalNAcT2在mRNA水平的表達(dá)。為了進(jìn)一步研究釩影響HL-60細(xì)胞增殖是否與ppGalNAc—T2相關(guān),對(duì)HL-60細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)
3、染ppGalNAc—T2 RNA干擾載體,觀察抑制ppGalNAc—T2的表達(dá)對(duì)釩影響的HL-60細(xì)胞增殖和粘附產(chǎn)生的改變。 結(jié)果:對(duì)ppGalNAcT2進(jìn)行了分子動(dòng)力學(xué)模擬,識(shí)別出了影響酶活性的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域loopB。將VO3與ppGalNAc—T2進(jìn)行了成功對(duì)接,發(fā)現(xiàn)VO3可能抑制ppGalNAc—T2的活性。此外針對(duì)HL-60細(xì)胞加入不同濃度的偏釩酸鈉,發(fā)現(xiàn)低濃度釩促進(jìn)細(xì)胞增殖,高濃度釩抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并且不同劑量的偏釩酸鈉影響
4、了ppGalNAc—T2在mRNA水平的表達(dá)。并對(duì)細(xì)胞的黏附性產(chǎn)生了影響。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ppGalNAc—T2RNA干擾載體發(fā)現(xiàn)抑制ppGalNAc—T2的表達(dá)促使HL-60亞細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖受到抑制;且無(wú)論是在偏釩酸鈉高濃度還是低濃度,HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)率均降低;推測(cè)抑制ppGalNAc—T2在蛋白水平的表達(dá)可以有效促進(jìn)釩誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡,同時(shí)還觀察到抑制ppGalNAc—T2在蛋白水平的表達(dá)影響了在一定濃度偏釩酸鈉作用下HL-60
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