阿霉素脂質(zhì)納米粒的制備及細(xì)胞學(xué)研究.pdf

1、抗癌藥物阿霉素是臨床上普遍使用的廣譜抗腫瘤藥物。但是由于藥物的反復(fù)使用，腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物產(chǎn)生了耐藥性，這也是臨床上腫瘤化學(xué)治療失敗的主要原因之一。尋找高效和低毒，并能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的藥物載體已成為腫瘤治療亟待解決的首要問題之一。針對(duì)抗腫瘤藥物的這個(gè)問題，本課題設(shè)計(jì)了一種核殼型的脂質(zhì)納米粒，并考察了載阿霉素制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。在此基礎(chǔ)上考察了脂質(zhì)納米粒的耐藥機(jī)制，為探索更多新型高效的納米載體提供了參考。
　　 本論文首

2、先將阿霉素與PLGA接枝制備了阿霉素-PLGA接枝共聚物，并應(yīng)用1H-NMR和GPC進(jìn)行表征。以合成的阿霉素-PLGA接枝共聚物為原料，采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備阿霉素-PLGA納米粒，并對(duì)其形態(tài)、粒徑、電位、釋藥行為進(jìn)行了考察。
　　 接著采用薄膜分散法制備了外層磷脂層，利用制備的阿霉素-PLGA納米粒為核心，孵育包裹DPPC脂質(zhì)層制備核殼型脂質(zhì)納米粒。并對(duì)zeta電位、粒徑、形態(tài)進(jìn)行表征，結(jié)果顯示脂質(zhì)納米粒的形態(tài)為球形，粒徑約

3、為250nm，與DLS粒徑測試結(jié)果相一致，并且從圖中可以清晰的看到納米粒外層包裹的脂質(zhì)層。Zeta電位結(jié)果顯示脂質(zhì)納米粒的電位在-10～5mV，并且分布均勻。
　　 繼而用MTT法考察空白載體材料的生物相容性，結(jié)果表明制備的脂質(zhì)納米?；緹o細(xì)胞毒性，材料具有良好的生物相容性。同時(shí)考察阿霉素脂質(zhì)納米粒對(duì)四種細(xì)胞株MCF-7、MCF-7/ADR、HL-60、HL-60/ADR的細(xì)胞毒性，與游離藥物阿霉素相比，載藥脂質(zhì)納米粒對(duì)耐藥株細(xì)

4、胞毒性明顯提高，說明載藥脂質(zhì)納米粒在一定程度上可以逆轉(zhuǎn)耐藥株細(xì)胞的多藥耐藥性。使用激光共聚焦顯微鏡觀察了載藥脂質(zhì)納米粒的入胞及入核情況，圖片表明脂質(zhì)納米粒能夠?qū)乃幬飻y帶進(jìn)入細(xì)胞核，再次驗(yàn)證了脂質(zhì)納米粒對(duì)細(xì)胞的抑制作用。使用流式細(xì)胞術(shù)考察藥物在細(xì)胞內(nèi)的蓄積情況，數(shù)據(jù)顯示隨著時(shí)間的推移脂質(zhì)納米?？梢栽谀退幖?xì)胞內(nèi)蓄積。
　　 小分子藥物主要通過內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞，但在內(nèi)吞過程中，藥物一般會(huì)與內(nèi)吞小體結(jié)合并被溶酶體內(nèi)的水解酶降解，使

5、藥物不能很好地發(fā)揮治療效果，這個(gè)過程在很大程度上限制了納米制劑在臨床中的應(yīng)用。鈣黃綠素是一種小分子水溶性的熒光探針，文獻(xiàn)報(bào)道游離的鈣黃綠素不能進(jìn)入細(xì)胞，因而常作為納米制劑的藥物模型，用來評(píng)價(jià)藥物在細(xì)胞內(nèi)的攝取情況。本課題利用鈣黃綠素作為模型藥物，制備鈣黃綠素脂質(zhì)納米粒，并初步考察其在四種細(xì)胞的攝取途徑以及在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的攝取機(jī)制。結(jié)果顯示，鈣黃綠素脂質(zhì)納米粒能夠逃避溶酶體的消化進(jìn)入細(xì)胞核，從機(jī)制證明了脂質(zhì)納米粒對(duì)包載藥物的運(yùn)載作用。為了研