神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF在綠殼蛋雞卵泡和輸卵管中的表達(dá)及對(duì)卵泡發(fā)育的調(diào)控.pdf

1、鳥(niǎo)類的排卵過(guò)程為卵巢發(fā)育成熟并產(chǎn)生成熟的卵泡，卵泡脫離卵巢通過(guò)輸卵管的各個(gè)部分形成完整的蛋，并最終排出。而在這個(gè)過(guò)程中卵巢和輸卵管受到諸多的生長(zhǎng)因子和激素的調(diào)控。通過(guò)選育培養(yǎng)出的蛋雞在進(jìn)入高產(chǎn)期后幾乎每天產(chǎn)蛋，其原因在于蛋雞卵泡在生殖階段可持續(xù)發(fā)育、并排卵和受精，卵巢排卵后亦不形成黃體，生殖周期極短，是作為生殖系統(tǒng)研究的理想試驗(yàn)動(dòng)物。本試驗(yàn)以中國(guó)地方特色蛋雞品種綠殼蛋雞為試驗(yàn)材料，測(cè)定不同產(chǎn)蛋時(shí)期的等級(jí)前卵泡、優(yōu)勢(shì)等級(jí)卵泡和輸卵管中的神

2、經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF及其受體的mRNA表達(dá)量，并對(duì)產(chǎn)蛋期和就巢期的組織進(jìn)行NGF及其受體的表達(dá)對(duì)比，同時(shí)通過(guò)體外培養(yǎng)的方式對(duì)綠殼蛋雞的F1卵泡顆粒細(xì)胞培養(yǎng)并添加NGF蛋白，測(cè)定各個(gè)受體的mRNA表達(dá)量和性腺激素的分泌量。結(jié)果如下:
　　通過(guò)對(duì)綠殼蛋雞不同產(chǎn)蛋階段(19W、33W、50W、64W)的生殖組織進(jìn)行采樣并提取mRNA，并進(jìn)行熒光定量對(duì)其卵泡和輸卵管的NGF及其受體的mRNA表達(dá)量測(cè)定。結(jié)果表明:NGF在綠殼蛋雞各個(gè)產(chǎn)蛋時(shí)期中

3、的卵泡和輸卵管中都有表達(dá);在等級(jí)前卵泡中，除了產(chǎn)蛋末期外，其他時(shí)期的小白卵泡SWF的NGF和其高親和力受體酪氨酸激酶A(TrkA)的mRNA表達(dá)量要顯著高于其他等級(jí)前卵泡(P＜0.05)，且隨著等級(jí)前卵泡的發(fā)育，NGF的表達(dá)量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，而在整個(gè)產(chǎn)蛋時(shí)期中，NGF在產(chǎn)蛋高峰期表達(dá)量最高;在等級(jí)卵泡中，NGF及其受體在F4卵泡中表達(dá)量在各時(shí)期都較高，且在產(chǎn)蛋前期和高峰期，F(xiàn)1-F4的mRNA表達(dá)量都高于F5的mRNA表達(dá)量，而在整個(gè)產(chǎn)

4、蛋周期中，NGF的表達(dá)量在產(chǎn)蛋高峰期處于峰值;每個(gè)時(shí)期的輸卵管各部位都有NGF的表達(dá)，且表達(dá)量隨著綠殼蛋雞產(chǎn)蛋周期的變化而變化，在產(chǎn)蛋后期NGF及其高親和力受體表達(dá)量最高。以上結(jié)果說(shuō)明，NGF的表達(dá)量與蛋雞的生殖狀況和產(chǎn)蛋性能相關(guān)，推測(cè)NGF可能參與了調(diào)控卵巢和輸卵管生長(zhǎng)發(fā)育并有助于蛋雞產(chǎn)蛋。
　　利用熒光定量測(cè)定方法對(duì)綠殼蛋雞產(chǎn)蛋期和就巢期各組織的NGF及其受體的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果表明:產(chǎn)蛋期的卵巢大于就巢期卵巢，且具有小黃卵泡

5、SYF和F1-F6卵泡，而就巢期卵巢處于萎縮形態(tài)，沒(méi)有優(yōu)勢(shì)卵泡;在產(chǎn)蛋期的卵巢基質(zhì)中，NGF及其受體顯著高于就巢期(P＜0.05);在等級(jí)前卵泡中，SWF和LWF中的NGF及其高親和力受體在產(chǎn)蛋期的mRNA的表達(dá)量顯著高于就巢期（P＜0.05）。以上結(jié)果說(shuō)明NGF及其受體在卵巢組織中的表達(dá)與禽類產(chǎn)蛋周期有影響，并可能參與了禽類產(chǎn)蛋時(shí)期與就巢時(shí)期的調(diào)控，NGF的表達(dá)有助于激活非發(fā)情期卵巢并改變卵巢形態(tài)，促使等級(jí)前卵泡發(fā)育成為等級(jí)優(yōu)勢(shì)卵泡。

6、
　　通過(guò)對(duì)F1卵泡顆粒細(xì)胞離體培養(yǎng)，添加NGF蛋白并進(jìn)行受體基因的熒光定量及激素的Elisa檢查，探究NGF蛋白在蛋雞卵泡發(fā)育過(guò)程中的作用。結(jié)果表明:在添加不同濃度NGF蛋白處理后，顆粒細(xì)胞中的p75受體的表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，且隨著NGF蛋白的濃度升高而升高;處理不同濃度的NGF蛋白后，顆粒細(xì)胞中的FSHR和LHR也顯著升高（P＜0.05），且存在正相關(guān)關(guān)系;通過(guò)Elisa檢查發(fā)現(xiàn)，添加NGF蛋白處理后的顆粒細(xì)胞中雌

7、激素的分泌顯著升高（P＜0.05），而孕激素則相反;在依次添加NGF和FSH處理后發(fā)現(xiàn)，雌激素的分泌在單獨(dú)添加NGF和FSH時(shí)都將顯著升高（P＜0.05），而且同時(shí)添加有疊加效果，而孕激素的分泌則相反。以上結(jié)果表明，NGF在禽類卵泡中能促進(jìn)其LHR和FSHR的表達(dá)，通過(guò)加強(qiáng)細(xì)胞對(duì)激素的敏感性來(lái)調(diào)控卵泡的發(fā)育和排卵，并且影響動(dòng)物的生理周期。
　　綜上所述，NGF及其受體能促進(jìn)禽類早期卵巢和輸卵管的生長(zhǎng)和發(fā)育，并在卵巢和輸卵管成熟后，