鯉皰疹病毒Ⅱ型滅活疫苗免疫應答機理與保護效果研究.pdf

1、異育銀鯽(Carassius gibelio)是我國重要的經(jīng)濟魚類，在淡水養(yǎng)殖中占有非常重要的地位。近年來，我國鯽魚養(yǎng)殖業(yè)中暴發(fā)一種病毒性疾病——鯽造血器官壞死癥，其病原為鯉皰疹病毒Ⅱ型（Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2），給鯽魚養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟損失，嚴重影響了鯽魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。疫苗免疫被認為是預防水產(chǎn)養(yǎng)殖動物傳染性疾病最為有效的方法。本研究對CyHV-2細胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備方法、有效免疫劑量、鯽魚免疫后的外

2、周血免疫指標、血清生化指標變化規(guī)律與保護效果進行了研究，初步建立一種預防鯽造血器官壞死癥的免疫方法。本論文的主要內(nèi)容如下:
　　1.采用β-丙內(nèi)酯（β-propiolactone，BPL）滅活細胞培養(yǎng)的鯉皰疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）制備滅活疫苗，分別以不同劑量的疫苗通過腹腔注射免疫健康異育銀鯽。在免疫后7、14、21、28d，從對照組和各免疫組中隨機挑選三尾鯽魚尾靜脈采血，取血清進行中和抗體滴度測定。免疫30d后攻毒試驗，每尾鯽魚

3、經(jīng)腹腔注射500ul的1.0×107TCID50ml-1的CyHV-2活病毒，持續(xù)觀察14d，記錄魚體死亡情況，評價不同劑量疫苗的免疫保護效果。結果顯示，免疫劑量為1.0×107TCID50ml-1的試驗組，在人工感染試驗后，其相對免疫保護力可達71.4％。
　　2.鯉皰疹病毒Ⅱ型滅活疫苗注射免疫健康鯽魚，分別于免疫后不同時間點采集魚體外周血和組織樣，計數(shù)外周血紅細胞和白細胞數(shù)以及白細胞分類計數(shù)，測定吞噬細胞活性、血清的抗體效價和

4、血清酶活性，檢測免疫相關基因表達量的變化。研究表明，免疫鯽魚外周血中紅細胞和白細胞數(shù)目在免疫后一周內(nèi)顯著增加，并于第4天和第7天達峰值，且極顯著高于對照組(P＜0.01)。白細胞分類計數(shù)中嗜中性粒細胞和單核細胞百分比分別在第4天和第7天到達最高值;隨后，淋巴細胞百分比在免疫后第14天開始顯著高于對照組(0.01＜P＜0.05)，第21天達峰值。免疫后一周內(nèi)細胞吞噬活性顯著升高，且吞噬百分比和吞噬指數(shù)均在第4天達到最高值，分別為(33.5