左旋多巴及其代謝物藥動學(xué)和COMT基因多態(tài)性的研究.pdf

1、左旋多巴(Levodopa，L-dopa)是治療帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)最有效的藥物，它是多巴胺(Dopamine，DA)的前體藥物。它可以通過血腦屏障，并在腦內(nèi)被多巴脫羧酶(Dopadecarboxylase，DDC)脫羧轉(zhuǎn)化成DA而發(fā)揮作用。由于DDC不僅存在于腦中，在其他臟器和血管壁細(xì)胞內(nèi)也廣泛存在，如單用L-dopa，僅約1％藥物能進入中樞，故臨床上多采用L-dopa合并外周多巴脫羧酶抑制劑(Dop

2、adecarboxylaseinhibitor，DDCI)如卡比多巴(Carbidopa，C-dopa)或芐絲肼(Benserazide，BSZ)制成復(fù)方制劑，以此提高L-dopa進入中樞的量。其中，卡左雙多巴控釋片(商品名：息寧(R))為目前國內(nèi)較常用的L-dopa復(fù)方制劑。
　　L-dopa口服后吸收迅速，并在體內(nèi)快速被代謝。主要經(jīng)兩條途徑代謝，一條是經(jīng)DDC脫羧成DA，另一條是經(jīng)兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(Catech01-O-

3、methyltransferase，COMT)代謝成3-氧甲基多巴(3-O-methyldopa，3-OMD)。在合用外周DDCI如C-dopa情況下，經(jīng)COMT代謝成為其主要代謝途徑。臨床發(fā)現(xiàn)，患者給予L-dopa制劑后，血藥濃度個體差異很大。
　　COMT是體內(nèi)具有生物活性或毒性的兒茶酚胺結(jié)構(gòu)化合物的主要代謝酶，如DA和L-dopa，是L-dopa代謝途徑中重要的代謝酶，COMT體內(nèi)活性差異對其底物藥物的代謝有重要影響，而L-

4、dopa是COMT的底物藥物，所以COMT的基因多態(tài)性可能是L-dopa及其代謝物3-OMD產(chǎn)生藥動學(xué)個體差異的重要原因。
　　本課題考察了L-dopa及其代謝物3-OMD在中國男性健康志愿者中的藥動學(xué)特征，并考察了COMT基因多態(tài)性與L-dopa及其代謝物3-OMD藥動學(xué)的相關(guān)性。
　　課題的第一部分建立了同時測定人血漿中L-dopa和3-OMD的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)，并對方法進行驗證。藥物血漿測定

5、的預(yù)處理方法采用甲醇蛋白沉淀法。色譜條件：色譜柱為YMCPACKMB-ODS(150mm×2.1mm，3μm)；柱溫：50℃；流動相：甲醇：0.5％甲酸溶液(30:70，v/v)；流速：0.15mL/min；質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源(ESI)；檢測：正離子檢測；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(Multiplereactionmonitoring，MRM)；霧化氣流速：10L/min；氣簾氣流速：10L/min；碰撞氣流速：4L/min；噴霧

6、電壓：5000V；離子源溫度：500℃；采用BSZ為內(nèi)標(biāo)(Internalstandard，IS)。L-dopa、3-OMD的血漿濃度均在50～1000ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r值均>0.99)。最低定量濃度(Lowerlimitofquantification，LLOQ)均為50ng/mL，低、中、高三種濃度質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間的RSD均小于11％。日內(nèi)、日間平均準(zhǔn)確度在95.68％～104.50％之間。樣品多次凍融及在室溫下8

7、h，提取后24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。本研究所建立的方法，結(jié)果準(zhǔn)確可重現(xiàn)，可用于L-dopa及3-OMD的藥動學(xué)研究。
　　課題的第二部分考察了19名中國男性健康志愿者多次口服卡左雙多巴控釋片達穩(wěn)態(tài)后血漿中L-dopa及3-OMD的藥動學(xué)特征。L-dopa的主要藥動學(xué)參數(shù)AUC0-∞為3772.7±846.7ng·h/mL；Cssmax為754±147.7ng/mL；Tmax為2.0(1.0-4.0)h；3-OMD的主要藥動學(xué)參數(shù)AUC0

8、-∞為54580.7±23220.0ng.h/mL；Cssmax為2429.5±742.4ng/mL；Tmax為5.0(2.5-8.0)h，結(jié)果顯示，藥動學(xué)參數(shù)個體差異較大。
　　課題的第三部分采用直接測序法對以上19名受試者進行COMTG1947A、C1883G和G1966T三個位點的單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)檢測?？疾炝薈OMTG1947A、C1883G和G1966T位點

9、在受試者中的頻率分布，并分析了其中兩個位點(G1947A、C1883G)的基因多態(tài)性對L-dopa及其代謝物3-OMD的主要藥動學(xué)參數(shù)(AUC0-∞、Cssmax、Tmax)及兩者藥動學(xué)參數(shù)比率(AUC0-∞Ratio、CssmaxRatio)的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，COMTG1947A、C1883G兩個位點基因分布符合哈迪-溫伯格(Hardy-weinberg)平衡定律，樣本具有一定的群體代表性。G1966T位點未發(fā)現(xiàn)基因突變，均為T/T

10、型?；蚨鄳B(tài)性與藥動學(xué)參數(shù)的相關(guān)性研究表明，對于COMTC1883G位點，雜合子(C/G)組與野生型(C/C)組及突變純合子(G/G)組在L-dopa及3-OMD的AUC0-∞，AUC0-∞Ratio(L-dopa/3-OMD)數(shù)據(jù)上均出現(xiàn)顯著性差異，提示對臨床用藥角度而言，COMT基因C/G型攜帶者可能需要減少L-dopa制劑的用量，而G/G型攜帶者則可能需要增加L-dopa制劑的用量。
　　本課題的研究結(jié)果有助于臨床個體化給藥