人肝細(xì)胞癌靶向脂質(zhì)體超聲造影劑的制備及其顯像研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(HCC)是世界上較常見(jiàn)且惡性程度很高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年升高的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康和生命，但其早期定性定位診斷仍然非常困難。超聲造影劑及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展使人們對(duì)超聲造影在診斷肝臟腫瘤中的作用有了更進(jìn)一步地了解，但目前用于肝臟腫瘤研究的超聲造影劑是一種無(wú)定向選擇作用的全身性造影劑。研究發(fā)現(xiàn)[1,2]，抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體對(duì)肝細(xì)胞癌組織有很高的特異性，能選擇性定位于癌組織。設(shè)想若以該抗體為導(dǎo)向載體制備靶向造影

2、劑，則可使造影劑以更高的濃度聚集在靶組織，達(dá)到定向顯影的目的。 目的：在本科實(shí)驗(yàn)室研制脂質(zhì)體超聲造影劑“脂氟顯”的基礎(chǔ)上[3]，引入抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體導(dǎo)向技術(shù)，制備對(duì)HCC具有特異靶向作用的免疫脂質(zhì)體超聲造影劑，在體外對(duì)其免疫學(xué)性質(zhì)進(jìn)行鑒定，并探討該造影劑對(duì)荷人肝癌裸鼠腫瘤的特異增強(qiáng)顯像效果。 方法：1.采用靜電吸附法將抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體HAb18結(jié)合到脂質(zhì)體微泡表面，制備靶向脂質(zhì)體微泡造影劑；玻片凝集實(shí)驗(yàn)、熒光

3、免疫染色實(shí)驗(yàn)證明抗體與脂質(zhì)體微泡的結(jié)合；花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)、花環(huán)形成阻斷實(shí)驗(yàn)及熒光免疫染色實(shí)驗(yàn)研究靶向脂質(zhì)體微泡的體外尋靶作用；ELISA法檢測(cè)靶向脂質(zhì)體微泡上結(jié)合抗體的活性；細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法)評(píng)價(jià)靶向脂質(zhì)體微泡的安全性。 2.HHCC人肝癌細(xì)胞株體外培養(yǎng)傳代，BALB/c-nu裸小鼠皮下接種，建立荷人肝癌裸鼠動(dòng)物模型。分別用靶向脂質(zhì)體超聲造影劑或普通脂質(zhì)體超聲造影劑經(jīng)荷肝癌裸鼠尾靜脈注射超聲造影(ICU)，采用二次諧波顯像模式(

4、SHI)，利用目測(cè)觀察和視頻灰階分析技術(shù)，結(jié)合時(shí)間-強(qiáng)度曲線(TIC)來(lái)定量評(píng)價(jià)腫瘤的增強(qiáng)顯像效果。 結(jié)果：1.靶向脂質(zhì)體微泡的玻片凝集實(shí)驗(yàn)、熒光免疫染色實(shí)驗(yàn)均為陽(yáng)性；ELISA結(jié)果顯示，靶向脂質(zhì)體微泡中單抗的活性與游離單抗基本一致；靶向脂質(zhì)體微泡圍繞人肝癌細(xì)胞HHCC形成花環(huán)，而對(duì)照細(xì)胞未見(jiàn)花環(huán)形成；靶向脂質(zhì)體微泡造影劑對(duì)人正常肝細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響。 2.成功建立了人肝癌裸鼠動(dòng)物模型，經(jīng)荷人肝癌裸鼠尾靜脈注入靶向脂質(zhì)體

5、超聲造影劑或普通脂質(zhì)體超聲造影劑后對(duì)比觀察，靶向造影劑組腫瘤在目測(cè)上回聲有逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，呈延遲增強(qiáng)表現(xiàn)，各實(shí)驗(yàn)鼠腫瘤增強(qiáng)程度有一定差異，體積較小腫瘤增強(qiáng)效果較為明顯。視頻定量分析靶向造影劑組腫瘤的增強(qiáng)顯影約在8min達(dá)到峰值，峰值灰階值為39.545±10.099dB；普通造影劑組腫瘤增強(qiáng)顯影達(dá)峰值時(shí)間約為10s，峰值灰階值為22.438±5.108dB，與靶向造影劑造影后灰階峰值比較相差顯著(P＜0.01)。 結(jié)論：采用靜電吸