高糖環(huán)境對豚鼠膀胱ICC樣細(xì)胞c-kit mRNA及蛋白的表達(dá)影響.pdf

1、目的：觀察體外高糖環(huán)境培養(yǎng)的豚鼠膀胱cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit基因mRNA及蛋白的表達(dá)變化，探討高糖環(huán)境對cajal 樣間質(zhì)細(xì)胞及SCF/c-kit信號通路傳導(dǎo)的影響，為下一步細(xì)胞功能學(xué)的逆轉(zhuǎn)及恢復(fù)細(xì)胞表型等研究提供前期證據(jù)。
　　 方法：本實驗應(yīng)用膠原酶酶解法，培養(yǎng)出體外環(huán)境中高糖狀態(tài)下的Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞，觀察高糖環(huán)境下豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，采用RT-PCR方法檢測膀胱平滑肌組織不同高糖濃度下Caja

2、l樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit基因mRNA表達(dá)量的變化；采用激光掃描共聚焦顯微鏡測定c-kit基因Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：RT-PCR電泳結(jié)果經(jīng)半定量分析顯示高糖組培養(yǎng)的ICC樣細(xì)胞C-kit mRNA轉(zhuǎn)錄明顯較正對照組及無糖組降低（P<0.01），高糖組中15mmol/L組及30 mmol/L組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄無明顯差異性（P>0.05），60 mmol/L組與15mmol/L及30 mmol/L組比

3、較可見c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄明顯降低；膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit蛋白陽性染色為綠色熒光，經(jīng)波長為488 nm的激光激發(fā)后觀察顯示15mmol/L、30mmol/L組、60 mmol/L組胞膜蛋白表達(dá)較正常對照組減弱，有明顯差異性（P=0.00），各高糖組組間蛋白表達(dá)無明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：高糖環(huán)境可造成Cajal 樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit基因mRNA 及蛋白表達(dá)水平明顯較正常對照組降低，提示其轉(zhuǎn)錄和翻譯水

4、平異?？蓪?dǎo)使Cajal 樣細(xì)胞失去SCF/c-kit信號通路異常，導(dǎo)致Cajal 樣間質(zhì)細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu)障礙，在分子生物學(xué)立場上證明了高糖環(huán)境對ICC 樣細(xì)胞及SCF/C-kit信號傳導(dǎo)的影響，從而導(dǎo)致高糖環(huán)境下膀胱逼尿肌中SCF/C-kit信號通路異常，ICC樣細(xì)胞形態(tài)、分布及功能缺陷，進(jìn)而推斷其可能是糖尿病膀胱病變形成的機制之一，為DCP 發(fā)病機制的研究及尋找新的治療手段提供理論依據(jù)，證明其可能是糖尿病膀胱病變（diabetic cy