雞ERα基因胚胎組織表達差異及其啟動子活性分析.pdf

1、禽類作為研究其他脊椎動物的重要模式生物，其性別分化和性腺發(fā)育的相關(guān)研究一直是發(fā)育生物學(xué)的研究熱點。性激素在性別分化和性腺發(fā)育方面起到了重要的作用，有研究表明雌激素合成的關(guān)鍵酶芳香化酶可以導(dǎo)致雄性雞胚的雌性化，這說明雌激素在雞胚早期性腺發(fā)育中起到重要作用。
　　雞雌激素受體cERα基因有五個啟動子，分別啟動轉(zhuǎn)錄形成多個5'UTR不同的cERα mRNA剪切體，本研究擬對雞胚胎期cERα基因的多個剪切體進行研究，用實時熒光量PCR的方

2、法對cERα基因多個剪切體在雞胚五個時期八個組織中的表達情況進行檢測。
　　實驗結(jié)果表明cERα基因的B、C、D三種剪切體在雞胚五個時期(E10.5、E12.5、E14.5、E16.5、E18.5)八個組織（心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦泡、肌肉、性腺）中均有表達，在性腺中表達量最高，且在雌雄兩性中呈現(xiàn)表達差異，均為雌性表達量高于雄性;根據(jù)cERα基因的B、C、D三種剪切體均在性腺中高表達的實驗結(jié)果，進一步對三種剪切體在性腺中的

3、相對表達情況進行了定量檢測，發(fā)現(xiàn)三種剪切體在不同時期性腺中的相對表達趨勢基本一致，且雌性均在E14.5時表達量下調(diào)，三種剪切體的相對表達水平表現(xiàn)為C＞D＞B;同時使用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的方法在CEF、DF1和PK15三種細(xì)胞系中對六個啟動子(A1、A2、A12、B、C、D)重組載體進行了活性檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CEF、DF1細(xì)胞中均檢測到了啟動子活性，PK15細(xì)胞中沒有檢測到啟動子活性。CEF細(xì)胞中啟動子重組載體相對活性表現(xiàn)為D＞B＞C