BRAF基因與甲狀腺癌臨床及其預(yù)后關(guān)系的分子生物學(xué)研究.pdf

1、目的：最近研究發(fā)現(xiàn)的BRAFV600E突變是甲狀腺腫瘤形成的一種重要遺傳學(xué)事件，在PTC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起著重要作用。本研究旨在探討甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生機(jī)制，研究其分子遺傳學(xué)改變與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，并為其早期分子診斷、預(yù)后監(jiān)測(cè)和靶基因治療提供客觀依據(jù)。同時(shí)，采用RFLP-PCR和MASA-PCR兩種方法檢測(cè)基因突變，并進(jìn)行比較，以提高基因突變的檢出率，尋找一種高效、敏感、特異的突變檢測(cè)技術(shù)。 方法：本研究收集了新疆石河

2、子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科1983～2005年的PTC石蠟包埋組織86例，對(duì)照組42例(濾泡性癌7例，髓樣癌2例，未分化癌2例，甲狀腺腺瘤15例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫15例及癌旁正常組織1例)。所有病例均由兩名以上病理學(xué)教授按照WHO分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。對(duì)97例甲狀腺癌組織進(jìn)行了病理形態(tài)學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)染色后，分別采用RFLP-PCR和MASA-PCR技術(shù)檢測(cè)BRAFV600W突變，分析BRAFV600E突變與其臨床病理學(xué)特征之間

3、的關(guān)系。 結(jié)果：僅在67.4％(58/86)的PTC和1例甲狀腺未分化癌中檢測(cè)到BRAFV600E突變；PTC中，主要見(jiàn)于經(jīng)典型PTC和微小癌，其突變率分別為73.0％(54/74)和2/3，對(duì)照組甲狀腺良惡性病變中均未檢測(cè)到此突變。由于BRAFV600E突變與RET/PTC重排均為PTC中常見(jiàn)的遺傳學(xué)事件，因此，在將BRAFV600E突變與本實(shí)驗(yàn)組周曉明同學(xué)用RT-PCR檢測(cè)的RET/PTC重排結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)PTC中BRA

4、FV600E突變與RET/PTC重排相互獨(dú)立存在。說(shuō)明兩者均為甲狀腺乳頭狀癌特有的遺傳學(xué)改變，其致癌機(jī)理可能不同，但兩者的聯(lián)合使用可提高PTC的診斷與鑒別診斷。 97例甲狀腺癌的免疫組織化學(xué)染色顯示，P21ras蛋白陽(yáng)性率為73.2％，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率為70.0％，與未發(fā)生轉(zhuǎn)移組相比較，無(wú)顯著性差異；Ki-67分布指數(shù)多在Ⅰ級(jí)，僅有25例在Ⅱ～Ⅲ級(jí)；在隨訪(fǎng)44的例患者中，有10例發(fā)生了復(fù)發(fā)，13例Ki-67分布指數(shù)在Ⅱ～Ⅲ級(jí)；

5、43例甲狀腺癌組織RET抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，RET蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為30.8％，主要表達(dá)于PTC組織中，乳頭狀癌和濾泡癌中陽(yáng)性率分別為34.4％和14.3％，其它甲狀腺惡性腫瘤中均不表達(dá)。RET蛋白和Ki-67的高表達(dá)可能與甲狀腺癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有關(guān)，可作為預(yù)后評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)。 結(jié)論：1、BRAFV600E突變僅見(jiàn)于PTC和部分甲狀腺未分化癌。PTC中BRAFV600E突變率為67.4％，表明BRAFV600E突變是成人散發(fā)性PT

6、C的特異性分子遺傳學(xué)改變，因此可用于PTC的診斷與鑒別診斷。2、BRAFV600E突變可能是PTC表型的重要決定因素之一，可用于PTC的分型及預(yù)后評(píng)價(jià)。3、PTC中，BRAFV600E突變和RET/PTC重排相互獨(dú)立存在，說(shuō)明BRAFV600E和RET/PTC在PTC形成中可能是相互獨(dú)立的遺傳學(xué)事件，其致癌機(jī)制可能不同。4、RET蛋白和Ki-67的高表達(dá)可能與甲狀腺乳頭狀癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有關(guān)，可作為預(yù)后評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)。5、檢測(cè)甲狀腺癌