肺部炎癥反應(yīng)對纖維肉瘤肺轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、研究背景:
　　 隨著腫瘤發(fā)病率逐年升高，惡性腫瘤已成為目前危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，也是造成人類死亡的主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，2020年全球癌癥新發(fā)病例將達(dá)到2000萬，死亡將達(dá)1200萬，癌癥將是新世紀(jì)人類的第一殺手，并成為全球最大的公共衛(wèi)生問題。惡性腫瘤是一種細(xì)胞的異型增生，它來自于正常細(xì)胞，又不同于正常細(xì)胞，它一方面不受控制的生長繁殖，另一方面又侵犯鄰近正常并轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處的組織器官。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的最顯著的生物學(xué)

2、特征，是臨床上大多數(shù)腫瘤患者治療失敗和致死的主要原因。這是一個多步驟、多因素參與的極其復(fù)雜的過程，受到腫瘤本身和宿主環(huán)境等因素的影響。近年來隨著對惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究不斷深入，人們越來越認(rèn)識到腫瘤的炎性微環(huán)境在致癌性因素中占重要有地位，炎癥與腫瘤的關(guān)系也以成為人們研究的焦點(diǎn)。本研究通過建立炎癥實(shí)驗(yàn)動物模型及其基礎(chǔ)上建立腫瘤模型，旨在探討炎癥在腫瘤發(fā)展過程中的作用。
　　 研究方法:
　　 將C57BL/6雌性小鼠隨

3、機(jī)分成7組，其中LPS、LT、LC及Cele組4組小鼠，腹腔內(nèi)注射濃度為1mg/mlLPS0.1ml(5mg/Kg)，連續(xù)3天;PBS、PT及PC組3組小鼠，腹腔內(nèi)注射PBS0.1ml(5mg/Kg)，連續(xù)注射3天。從實(shí)驗(yàn)第5天開始各組小鼠分別給予不同處理，LPS組和PBS組:小鼠全部處死，觀察肺組織病理表現(xiàn)、測定肺組織干濕重比、肺組織及肝組織重量。PT組及LT組:分別經(jīng)尾靜脈注射纖維肉瘤細(xì)胞T241，細(xì)胞濃度為1×107/ml，2周后

4、處死全部小鼠，觀察肺組織病理表現(xiàn)、肉眼觀察及HE染色比較兩組小鼠出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量;免疫熒光CD31染色比較兩組小鼠肺組織內(nèi)血管密度。PC、LC及Cele組:實(shí)驗(yàn)小鼠皮下接種T241細(xì)胞株，細(xì)胞濃度為1×107/ml，其中PC、LC組小鼠自由進(jìn)食，Cele組小鼠給予塞來昔布0.5mg/Kg/d灌胃。4～5天后3組小鼠背部均出現(xiàn)瘤結(jié)節(jié)，開始測量腫瘤體積，每隔2～3天觀察一次。21天后處死小鼠，觀察肺組織病理變化及免疫熒光CD31染色比較兩組

5、小鼠肺組織內(nèi)血管密度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)來表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本比較采用t檢驗(yàn)，肺轉(zhuǎn)移率比較用卡方檢驗(yàn)。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.炎癥實(shí)驗(yàn)動物模型的建立
　　 LPS組小鼠腹腔注射脂多糖0.1ml(5mg/Kg)，連續(xù)3天，自第2天開始小鼠逐漸出現(xiàn)眼內(nèi)分泌物，消瘦，頸背部毛發(fā)豎起、色澤暗淡，行動遲緩、反應(yīng)能力低下，攝食量急劇減少。PBS組實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射PB

6、S0.1ml，連續(xù)3天，小鼠無明顯變化。第5天處死后，兩組小鼠肺臟重量比較P＜0.001，肝臟重量比較P=0.005，兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺組織含水量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。肺組織病理學(xué)表現(xiàn):PBS組小鼠肺臟結(jié)構(gòu)致密，肺泡壁連續(xù)規(guī)整，肺泡內(nèi)無組織液及紅細(xì)胞滲出。LPS組小鼠肉眼觀肺葉腫脹、充血，呈暗紅色，鏡下見肺泡壁連續(xù)性中斷，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，肺泡腔內(nèi)可見大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞，氣道粘膜見有大量炎性細(xì)胞浸潤。

7、　　 2.肺部炎癥對纖維肉瘤生長與轉(zhuǎn)移的影響
　　 2.1、PC組、LC組和Cele組
　　 PC組、LC組和Cele組實(shí)驗(yàn)小鼠皮下接種T241細(xì)胞株4～5天后，所有小鼠注射部位均可觸及局部隆起包塊，隨著腫瘤體積增大，小鼠逐漸出現(xiàn)體重下降、攝食量減少、毛發(fā)豎起、色澤暗淡，行動遲緩、反應(yīng)能力低下等表現(xiàn)。LC組小鼠的瘤結(jié)節(jié)明顯比PC組生長迅速，自第10天開始有明顯差異(P＜0.05);每個時間檢測都可觀察到塞來昔布(Cel

8、ecoxib)對腫瘤生長的抑制作用，且隨時間延長，腫瘤生長受抑越明顯。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，Cele組小鼠腫瘤平均體積與LC組相比減少41.70％，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.2、LT組和PT組
　　 實(shí)驗(yàn)第5天LT組和PT組小鼠均經(jīng)尾靜脈注射細(xì)胞濃度為1×107/ml纖維肉瘤細(xì)胞T2410.1ml(106)。LT組小鼠注射腫瘤細(xì)胞時精神狀態(tài)、食欲及毛色較前好轉(zhuǎn)，眼部分泌物消失，體重逐漸增加。但注射腫瘤細(xì)胞9天后再次出現(xiàn)食欲下

9、降，頸背部毛發(fā)豎起、色澤暗淡，行動遲緩、反應(yīng)能力低下，體重下降，至14天時已有部分小鼠精神萎靡，活動困難，不能進(jìn)食，瀕臨死亡。PT組小鼠精神好，食欲正常，毛色光亮，體重增加，注射細(xì)胞12天后小鼠食欲較前稍有下降，毛色干燥，精神可，活動靈活。肺組織病理表現(xiàn):肉眼觀察，LT組70％(7/10)小鼠肺表面可見1個或多個腫瘤結(jié)節(jié)，PT組10％(1/10)小鼠肺表面見腫瘤結(jié)節(jié)，P=0.02，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;HE染色:LT組部分肺泡壁結(jié)構(gòu)破壞，結(jié)

10、構(gòu)不連續(xù)，局部有纖維組織增生，肺泡壁增厚，有炎癥細(xì)胞浸潤，80％(8/10)小鼠肺內(nèi)可見腫瘤組織，且組織內(nèi)血管豐富，充血，腫瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞大，核大、深染，細(xì)胞數(shù)明顯增多，細(xì)胞排列紊亂，極性消失。PT組肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，偶有局部不連續(xù)，炎癥細(xì)胞較少，20％(2/10)小鼠肺內(nèi)可見腫瘤組織，組織內(nèi)血管增生不明顯，無明顯血管充血。HE染色下，兩組小鼠腫瘤發(fā)病率比較P=0.023，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.小鼠

11、腹腔注射LPS5mg/kg，連續(xù)3天，可建立肺部炎癥模型。
　　 2.LC組和PC組小鼠背部種植纖維肉瘤細(xì)胞T241，LC組比PC組小鼠腫瘤生長速度快，肺部組織損傷嚴(yán)重，毛細(xì)血管密度增加，表明炎癥反應(yīng)可促進(jìn)腫瘤生長。
　　 3.Cele組和LC組小鼠背部種植纖維肉瘤細(xì)胞T241，Cele組比LC組小鼠腫瘤生長速度慢，肺部組織損傷輕，毛細(xì)血管密度降低，表明抗炎癥治療可抑制腫瘤生長。
　　 4.LT組和PT組小鼠均經(jīng)