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1、表皮生長因子受體(EGFR)和Fms樣酪氨酸激酶(FLT3)是兩種重要的具有酪氨酸激酶活性的信號轉(zhuǎn)導的跨膜受體。EGFR信號途徑與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。Fms樣酪氨酸激酶(FLT3)在多種白血病的患者中非正常表達，它們在促進診斷與治療腫瘤上具有非常重要的作用。 巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)表達系統(tǒng)是一種高效的外源蛋白基因表達系統(tǒng)，具有高表達、高穩(wěn)定、高分泌、容易放大和成本低等優(yōu)點，所以，選擇畢赤酵母表
2、達系統(tǒng)來表達EGFR和FLT3。EGFR和FLT3的基因片段分別克隆到pPICZαA中，并通過測序鑒定。構(gòu)建好的pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT3分別經(jīng)過Sac Ⅰ和BstX Ⅰ進行線性化后，電轉(zhuǎn)化X33畢赤酵母中。用抗生素zeoein篩選陽性克隆，并篩選出多拷貝的菌株。篩選高表達菌株并優(yōu)化培養(yǎng)條件，例如：誘導的時間，甲醇的誘導濃度，以及磷酸鉀緩沖液(pH6.0)的影響。pPICZα A-EGFR/X33和pPICZαA
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