人絨毛膜癌干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及相關(guān)特性的初步研究.pdf

1、[目的]用無血清懸浮培養(yǎng)法從人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞系中分離培養(yǎng)絨毛膜癌干細(xì)胞樣細(xì)胞并對其特性進(jìn)行鑒定。
　　[方法]
　　(1)將人絨毛膜癌細(xì)胞系JEG-3制成單細(xì)胞懸液，懸浮于特殊配制的無血清培養(yǎng)基(Serum-free medium，SFM)中獲得JEG-3懸浮細(xì)胞球;
　　(2)流式細(xì)胞儀檢測JEG-3親本細(xì)胞及JEG-3懸浮細(xì)胞球表面標(biāo)志物CD44、CD133及ABCG2的表達(dá);
　　(3) Trans

2、well小室遷移實驗檢測JEG-3親本細(xì)胞及JEG-3懸浮細(xì)胞球的體外遷移能力;
　　(4)臺盼藍(lán)染色增殖實驗比較JEG-3親本細(xì)胞及JEG-3懸浮細(xì)胞球的增殖能力，并繪制生長曲線;
　　(5)將1000個細(xì)胞懸液置入SFM中培養(yǎng)，觀察并計算其腫瘤球形成率;
　　(6)有限稀釋法觀察懸浮細(xì)胞球單個細(xì)胞成球能力;
　　(7)將JEG懸浮細(xì)胞球細(xì)胞置于含有血清的培養(yǎng)基中使其誘導(dǎo)分化，并觀察其形態(tài)學(xué)的變化;
　　

3、[結(jié)果]
　　(1)人絨毛膜癌JEG-3可在SFM中存活、增殖，形成懸浮生長的細(xì)胞球，并可連續(xù)傳代;
　　(2)流式細(xì)胞儀檢測干細(xì)胞表面標(biāo)記物，JEG-3懸浮細(xì)胞球表面標(biāo)志物CD44、CD133及ABCG2的表達(dá)均明顯高于JEG-3親本細(xì)胞（P＜0.05）;
　　(3) Transwell小室檢測JEG-3親本細(xì)胞及JEG-3懸浮細(xì)胞球的遷移能力，JEG-3懸浮細(xì)胞球較JEG-3親本細(xì)胞具有更強(qiáng)的體外遷移能力（F值=8

4、.140，P值0.008，P值＜0.05）;
　　(4)臺盼藍(lán)染色的增殖實驗，JEG-3懸浮細(xì)胞球與JEG-3親本細(xì)胞相比，JEG-3懸浮細(xì)胞球具有更強(qiáng)的增殖能力(F值=2775.601，P值＜0.001);
　　(5) JEG-3親本細(xì)胞、第一代JEG-3懸浮細(xì)胞球和第三代JEG-3懸浮細(xì)胞球的腫瘤球形成率分別為（7.57±0.80）％、（7.23±0.33）％（7.52±0.62）％，三者比較(P＞0.05)，即JEG-

5、3親本細(xì)胞與不同代的JEG-3懸浮細(xì)胞球的成球率無明顯差異;
　　(6)有限稀釋法在96孔板中得到單個懸浮細(xì)胞球細(xì)胞，在顯微鏡下觀察到了單個細(xì)胞增殖成懸浮細(xì)胞球過程;
　　(7)將無血清培養(yǎng)基中的JEG-3懸浮細(xì)胞球細(xì)胞接種于含血清培養(yǎng)基中可重新貼壁分化，分化后細(xì)胞與JEG-3親本細(xì)胞形態(tài)無明顯差異。
　　[結(jié)論]
　　(1)絨癌JEG-3細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中可獲得絨毛膜癌干細(xì)胞樣細(xì)胞;
　　(2)獲得的