BRCA1相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性的研究.pdf

1、第一部分 BRCA1相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性的研究
　　目的：
　　乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌易感基因1(breast cancer type1 susceptibility protein，BRCA1)是乳腺癌中被廣泛深入研究的腫瘤易感基因之一。攜帶有突變型BRCA1基因的女性罹患乳腺癌的風(fēng)險高于攜帶野生型BRCA1基因的婦女。分子流行病學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1基因的突變與三陰性乳腺癌的發(fā)生

2、密切相關(guān)。BRCA1蛋白通過與蛋白復(fù)合體組成蛋白復(fù)合物發(fā)揮功能。本研究旨在研究BRCA1相關(guān)A蛋白復(fù)合物的相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，尋找和確定與漢族人群三陰性乳腺癌遺傳易感性相關(guān)的基因型和單體型。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)以上海地區(qū)漢族女性人群為研究對象。選取414例在2008年至2011年間在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受原發(fā)性乳腺癌手術(shù)的三陰性乳腺癌患者和354例健康婦女進(jìn)行對照。收集她們的外周血基因

3、組DNA，應(yīng)用Massarray技術(shù)檢測了病例組和對照組Abraxas，BRE，Rap80，BABAM1，BRCC36基因的37個SNP位點(diǎn)，隨后分析了不同基因型與三陰性乳腺癌發(fā)病的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　三陰性乳腺癌患者Abraxas，BRE，Rap80，BRCC36基因的各檢測位點(diǎn)多態(tài)性分布與正常對照組沒有顯著差異。BABAM1的SNP位點(diǎn)rs7250266突變的G等位基因在三陰性乳腺癌患者中頻率顯著低于在正常女性中的

4、頻率(p＜0.01)。基因分型顯示，rs7250266位點(diǎn)的CC、GC、GG三種基因型在三陰性乳腺癌和對照組的分布頻率有顯著差異(P=0.03)，與攜帶CC基因型的個體比較，攜帶GC型的個體的三陰性乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險顯著降低(GC: OR=0.70，95％ CI(0.51-0.97)，GG:OR=0.4895％CI(0.21-1.07)）。對MAF超致過1％的SNP的單體型分析顯示:和主要單體型相比，單體型rs7250266(G)/rs2

5、278256(G)/rs144376330(C)/rs10403581(C)/rs3745185(G)攜帶者及單體型rs7250266(G)/rs2278256(G)/rs144376330(C)/rs10403581(A)/rs3745185(G)攜帶者的三陰性乳腺癌患病風(fēng)險較低。
　　BABAM1基因的rs7250266的單核苷酸多態(tài)性與中國上海地區(qū)婦女的三陰性乳腺癌發(fā)病風(fēng)險相關(guān)，其突變型等位基因攜帶者罹患三陰性乳腺癌的風(fēng)險低

6、于野生型等位基因攜帶者。單體型分析也證實(shí)BABAM1基因的不同單體型間三陰性乳腺癌發(fā)病風(fēng)險不同。
　　第二部分 BABAM1基因的胚系突變和體細(xì)胞突變檢測及rs8170對于BABAM1與BRCA1相關(guān)A蛋白復(fù)合物中其他基因相互作用的影響分析
　　目的：
　　第一部分研究發(fā)現(xiàn)BABAM1基因的單核苷酸多態(tài)性與三陰性乳腺癌易感性相關(guān)，我們進(jìn)一步探索了中國人群中BABAM1基因的胚系突變情況，并檢測了腫瘤組織中BABAM1基

7、因的體細(xì)胞突變情況。我們同時探索了rs8170對于BABAM1蛋白與BRCA1相關(guān)A蛋白復(fù)合物其他蛋白(Abraxas，BRE、Rap80、BRCC36)間的相互作用的影響。
　　方法：
　　隨機(jī)抽取140例原發(fā)性乳腺癌患者的基因組DNA樣本和100例原發(fā)性乳腺癌腫瘤細(xì)胞DNA，進(jìn)行BABAM1基因外顯子和外顯子內(nèi)含子結(jié)合區(qū)域的PCR，測序檢測。對轉(zhuǎn)染了BABAM1基因表達(dá)和突變體質(zhì)粒載體的細(xì)胞利用免疫共沉淀方法獲得的BRC

8、A1相關(guān)A蛋白復(fù)合物，并使用Western blot檢驗(yàn)Rap80、BRE、BRCC36、Abraxas蛋白與BABAM1蛋白結(jié)合情況。
　　結(jié)果：
　　發(fā)現(xiàn)了兩個文獻(xiàn)沒有報道過的BABAM1基因組胚系突變，一個位于兩號外顯子，一個位于3'UTR。同時發(fā)現(xiàn)了一個腫瘤組織體細(xì)胞突變，位于七號外顯子。我們發(fā)現(xiàn)BABAM1缺失了羧基端的299-329aa的結(jié)構(gòu)會導(dǎo)致其與Rap80、Abraxas、BRCC36、BRE的結(jié)合能力的降

9、低。而缺失了其他部位氨基酸的BABAM1與上述其他BRCA1相關(guān)蛋白的結(jié)合能力沒有顯著改變。rs8170恰巧位于第9號外顯子區(qū)域，功能預(yù)測發(fā)現(xiàn)其突變將干擾BABAM1的mRNA的剪切，從而使BABAM1蛋白丟失其羧基端的序列，從而影響B(tài)ABAM1蛋白與其他蛋白的結(jié)合。
　　結(jié)論：
　　BABAM1羧基端的299-329aa是與R印80、BRE、BRCC36、Abraxas這些蛋白結(jié)合的部位。其突變可導(dǎo)致BRCA1相關(guān)A蛋白復(fù)

10、合物的功能異常。
　　第三部分二十年內(nèi)中國淋巴結(jié)陰性乳腺癌中腫瘤細(xì)胞增殖情況的改變及其與預(yù)后的關(guān)系
　　目的：
　　自1990年后，中國上海地區(qū)的乳腺癌的發(fā)病率迅速增長。國外已有研究表明:增殖情況是淋巴結(jié)陰性乳腺癌的重要預(yù)后因子。本研究探討的是:是否在這二十年間上海地區(qū)婦女的乳腺癌增殖情況和其他生化指標(biāo)也出現(xiàn)了改變，該變化是否與乳腺癌的預(yù)后相關(guān)。
　　方法：
　　研究者連續(xù)選取了89例在1983～1986年

11、間在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)且術(shù)后病理為淋巴結(jié)陰性、浸潤性乳腺癌的患者和105例連續(xù)的在2002～2003年間被診斷乳腺癌的患者。我們對這些患者的蠟塊進(jìn)行調(diào)取，重新染色檢驗(yàn)。這些患者的臨床、病理情況，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、CK5/6、Ki67、磷酸化組蛋白3(PPH3)和人表皮生長因子受體2(HER2)表達(dá)情況和有絲分裂指數(shù)被觀察、記錄。
　　結(jié)果：
　　中位79個月的隨訪顯示，兩組的無復(fù)發(fā)生存率沒有差