骨髓干細(xì)胞動(dòng)員對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)微血管及纖維化的影響.pdf

1、目的：探討干細(xì)胞因子(SCF)和粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻(UOO)大鼠包括血管內(nèi)皮祖細(xì)胞在內(nèi)的骨髓干細(xì)胞的動(dòng)員效果，并進(jìn)而探討干細(xì)胞的歸巢及對(duì)腎小管周微血管和間質(zhì)纖維化的影響及其可能機(jī)制，為干細(xì)胞移植在延緩腎病慢性進(jìn)展中的應(yīng)用提供新的途徑及理論依據(jù)。 方法： (1)56只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為7組：①Control組：皮下注射生理鹽水2ml／(kg-d)，連續(xù)5天。②SCF組：皮下注射SCF

2、200ug(kg-d)，連續(xù)5天。③G-CSF組：皮下注射G-CSF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。④SCF-G組：皮下注射SCF200ug(kg-d)和G-SF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。⑤Sham組：手術(shù)入路方式同UUO組，進(jìn)腹腔后分離右輸尿管但不結(jié)扎輸尿管。術(shù)后當(dāng)天即經(jīng)皮下注射生理鹽水2ml／(kg-d)，連續(xù)5天。⑥UUO組：行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。術(shù)后當(dāng)天即經(jīng)皮下注射生理鹽水2ml／(kg．d)，連續(xù)5天。⑦UU0+SCF

3、-G組：行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。術(shù)后當(dāng)天即皮下注射SCF200ug(kg-d)和G-CSF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。實(shí)驗(yàn)第5天處死大鼠，采集血、尿標(biāo)本，觀察以下指標(biāo)的變化：①流式細(xì)胞儀檢測(cè)靜脈血單個(gè)核細(xì)胞中CD34+、CD34+／CDl33+細(xì)胞。②檢測(cè)尿量、尿蛋白以及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐水平。 (2)128只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組，分別為Sham組、SCF-G組、UUO組、UUO+SCF-G組

4、，每組32只。于實(shí)驗(yàn)第5、14、21、28天每組各隨機(jī)抽取8只動(dòng)物處死，采集尿液、血液及腎臟組織標(biāo)本，觀察不同時(shí)間點(diǎn)以下指標(biāo)的變化：①檢測(cè)體重增長(zhǎng)、24小時(shí)尿蛋白定量以及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐水平；②腎間質(zhì)CD34陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目；③腎間質(zhì)Ⅷ因子陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目；④HE、PAS及Masson染色后在光鏡下觀察腎組織形態(tài)改變，并進(jìn)行間質(zhì)纖維化及間質(zhì)的病理?yè)p害積分。 (3)采集Sham組、UUO組、UUO+SCF-

5、G組三組大鼠血液、梗阻側(cè)殘余尿液及腎臟組織標(biāo)本，觀察不同時(shí)間點(diǎn)以下指標(biāo)的變化：①檢測(cè)血清、尿液及腎皮質(zhì)內(nèi)皮素-1(ET-1)含量；②腎皮質(zhì)血小板反應(yīng)蛋白1(TSP-1)mRNA表達(dá)的變化；③腎皮質(zhì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)論： ①干細(xì)胞因子和粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員效果并非完全呈平行關(guān)系，聯(lián)合使用可提高內(nèi)皮祖細(xì)胞和干細(xì)胞的動(dòng)員率，短期內(nèi)未見肝、腎毒副作用。 ②聯(lián)合應(yīng)用

6、干細(xì)胞因子和粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員的骨髓干細(xì)胞可以歸巢至受損的腎臟，有助于減少腎小管周微血管丟失，并進(jìn)而減輕腎間質(zhì)纖維化和間質(zhì)損害，保護(hù)腎功能。 ③單側(cè)輸尿管梗阻大鼠中存在腎小管周微血管的丟失，并與腎間質(zhì)纖維化及間質(zhì)病理?yè)p傷密切相關(guān)。腎皮質(zhì)內(nèi)皮素-1可作為腎小管周微血管損傷的指標(biāo)之一。 ④在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和血小板反應(yīng)蛋白1分別是腎小管周微血管的重要保護(hù)因子和損傷因子。血小板反應(yīng)蛋白l mRNA表達(dá)