PPARα激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：觀察過氧化物酶體增殖因子激活受體α(PPARα)激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移的影響，探討PPARα、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）在非諾貝特抗腫瘤作用中的意義。
　　方法：體外培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞，用不同濃度(0、12.5、25、50、75、100μmol/L)非諾貝特干預(yù)細(xì)胞后，四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測(cè)不同藥物濃度作用下肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)

2、胞凋亡率及細(xì)胞周期的分部情況;Hoechest染色法觀察A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察A549細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的影響;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺癌A549細(xì)胞侵襲能力的變化;提取A549細(xì)胞總RNA及蛋白，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中PPARα、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達(dá)情況，Wertern blot檢測(cè)細(xì)胞中MMP-2與MMP-9蛋白的表達(dá)水平;酶譜法檢測(cè)不同藥物濃度作用下細(xì)胞培養(yǎng)液

3、中MMP-2、MMP-9的酶活性。
　　結(jié)果：⑴細(xì)胞增殖抑制率:與對(duì)照組相比，非諾貝特組A549細(xì)胞增殖抑制率增大(P＜0.05)，且呈時(shí)間-劑量效應(yīng)。⑵細(xì)胞凋亡檢測(cè):與對(duì)照組比較，非諾貝特能夠誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡，且高濃度組誘導(dǎo)凋亡作用更加明顯。⑶細(xì)胞周期的檢測(cè):與對(duì)照組比較，非諾貝特組G0/G1期A549細(xì)胞數(shù)目減少，G2/M期的細(xì)胞數(shù)目增加，細(xì)胞阻滯于G2/M期，非諾貝特對(duì)A549細(xì)胞周期阻滯作用有時(shí)間-劑量關(guān)系。⑷Ho

4、echst33258染色觀察發(fā)現(xiàn)非諾貝特作用下肺癌A549細(xì)胞體積縮小，部分細(xì)胞膜被裂解，核固縮，呈致密濃染，高濃度(100μmol/L)組伴有凋亡小體出現(xiàn)。⑸細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:作用48小時(shí)后，陰性對(duì)照組細(xì)胞劃痕基本愈合，隨著非諾貝特濃度的增加，劃痕寬度越大，各組細(xì)胞遷移率分別為:對(duì)照組:(88.21±0.09)％,12.5μmol/L組:(71.70±0.47)％,25μ mol/L組:(48.23±0.69)％,50μmol/L組:

5、(30.45±0.53)％,75μ mol/L組:(20.90±0.31)％,100μmol/L組:(16.20±0.29)％，(P＜0.05)。⑹Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:陰性對(duì)照組有大量細(xì)胞穿過基底膜，藥物組有不同數(shù)量的細(xì)胞穿越基底膜，各非諾貝特藥物組(100、75、50、25、12.5)的侵襲抑制率分別為:(65.78±0.58)％、(48.50±0.23)％、(40.35±0.19)％、(30.97±0.45)％、(2

6、3.10±0.62)％，(P＜0.05)。⑺RT-PCR結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，非諾貝特處理48小時(shí)后，隨著藥物濃度的增加A549細(xì)胞中PPARα、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達(dá)增加，而MMP-2與MMP-9 mRNA的表達(dá)下降。⑻Wertern blot實(shí)驗(yàn)顯示:用非諾貝特干預(yù)A549細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞中MMP-2與MMP-9蛋白的表達(dá)水平均下降。⑼酶譜法檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí):非諾貝特干預(yù)肺癌A549細(xì)胞，能夠抑制MMP-2與M