PPARγ激動(dòng)劑調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞極性建立和遷移的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 細(xì)胞極性是細(xì)胞基本特征，指細(xì)胞成分、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞功能的不對(duì)稱(chēng)性分布，參與生物體多種重要生理病理過(guò)程，如細(xì)胞增殖、非對(duì)稱(chēng)分裂、細(xì)胞遷移等。腎小管上皮具備典型的上皮細(xì)胞極性特征，其細(xì)胞極性的調(diào)控參與了許多重要腎臟生理和病理過(guò)程，深入研究腎小管上皮細(xì)胞極性的調(diào)控機(jī)制以及相關(guān)的信號(hào)通路對(duì)于全面了解腎臟的正常組織形態(tài)發(fā)生，尋求控制腎囊腫性疾病腎囊腫和繼發(fā)纖維化的發(fā)生、發(fā)展都具有重要意義。本文主要探討過(guò)氧化物酶增值活化受體(

2、PPARγ)激動(dòng)劑羅格列酮在腎小管上皮細(xì)胞頂?shù)锥藰O性建立和細(xì)胞遷移過(guò)程中的作用
　　 方法:
　　 采用羅格列酮干預(yù)，建立MDCK(II)細(xì)胞三維培養(yǎng)模型，通過(guò)免疫熒光染色技術(shù)對(duì)囊腔形成的類(lèi)型和囊腔形成早期頂?shù)锥藰O性標(biāo)志蛋白定位進(jìn)行分析。
　　 在二維培養(yǎng)環(huán)境下利用鈣轉(zhuǎn)換模型，通過(guò)免疫熒光染色和測(cè)量穿膜電阻抗，研究羅格列酮對(duì)細(xì)胞頂端膜形成維持和緊密連接形成的影響。
　　 使用愈傷模型和免疫熒光染色技術(shù)，探

3、討羅格列酮對(duì)腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞遷移的作用。
　　 利用Western Blotting方法檢測(cè)羅格列酮對(duì)相關(guān)極性蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 我們發(fā)現(xiàn)，在三維培養(yǎng)MDCKII細(xì)胞7天后，羅格列酮組單囊腔的比例明顯下降（Rosiglitazone組18.74±6.26％，對(duì)照組66.20±7.69％，t=44.46，P=0.005），多囊腔的比例明顯升高（Rosiglitazone組67.98±8.09％，

4、對(duì)照組26.70±4.62％，t=6.046，P=0.0263）;但是極性蛋白Par3，apkc的定位沒(méi)有發(fā)生改變;同時(shí)在囊腔形成早期（2-5個(gè)細(xì)胞時(shí)），羅格列酮組頂端標(biāo)志蛋白Ezrin和側(cè)基底膜標(biāo)志蛋白E-cadherin發(fā)生異常定位。
　　 在二維培養(yǎng)條件下，通過(guò)鈣離子轉(zhuǎn)換實(shí)驗(yàn)，羅格列酮組延緩了頂端膜的形成（CS0h:對(duì)照組VACs占總細(xì)胞的比例為34.11±4.23％，Rosiglitazone組為42.36±3.87％;

5、 CS3h:對(duì)照組VACs占總細(xì)胞的比例為11.28±1.41％，Rosiglitazone組為28.44±2.30％），并且減弱了頂端膜對(duì)頂端膜蛋白的維持作用（CS3h:對(duì)照組未發(fā)生頂端蛋白內(nèi)陷的細(xì)胞占總細(xì)胞的比例為61.24±4.59％，Rosiglitazone組為12.38±2.69％，t=13.50，P=0.0054）;同時(shí)羅格列酮還延緩的緊密連接的形成，但并沒(méi)有阻礙最終形成;在蛋白水平上，發(fā)現(xiàn)下調(diào)極性蛋白Par3的表達(dá)。在愈

6、傷模型中，羅格列酮阻礙細(xì)胞遷移過(guò)程（對(duì)照組細(xì)胞的愈合率為37.63±2.50％，而Rosiglitazone干預(yù)組細(xì)胞的愈合率明顯低于對(duì)照組，僅為23.07±4.86％，t=4.524，P=0.0106）;羅格列酮影響極性蛋白Par3和Occludin在細(xì)胞遷移前緣的定位，并改變細(xì)胞骨架的形態(tài)，同時(shí)下調(diào)Occludin蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)論:
　　 在三維培養(yǎng)模型中，羅格列酮通過(guò)干擾頂?shù)锥说鞍自谀夷[形成早期的轉(zhuǎn)運(yùn)定位