β-catenin調(diào)控免疫細(xì)胞生存和分化及其機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開： 第一部分Fibronectin通過β—catenin途徑維持NK細(xì)胞的生存 組織微環(huán)境和細(xì)胞外基質(zhì)分子在維持細(xì)胞生存促進(jìn)細(xì)胞分化過程中具有重要作用。NK細(xì)胞是一類短壽命的細(xì)胞類型，尤其小鼠NK細(xì)胞分離后在體外存活時(shí)間更是少于24小時(shí)，因此需要在體外培養(yǎng)體系中加入外源性的細(xì)胞因子如IL-12、IL-15以維持小鼠NK細(xì)胞的生存。但是很多研究認(rèn)為NK細(xì)胞的體內(nèi)存活時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于體外，表明體內(nèi)不同組織

2、微環(huán)境為NK細(xì)胞的生存提供了支持環(huán)境。但是細(xì)胞外基質(zhì)分子如Fibronectin是否以及如何支持NK細(xì)胞的生存仍不為人所知。在本課題中，我們發(fā)現(xiàn)適當(dāng)濃度的Fibronectin(10μg/ml)能在體外維持NK細(xì)胞的生存。 在探討Fibronectin維持NK細(xì)胞生存的信號(hào)機(jī)制中，我們發(fā)現(xiàn)Fibronectin作用NK細(xì)胞后能夠上調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ibronectin通過結(jié)合NK細(xì)胞表面的CD11b

3、受體，募集并活化信號(hào)分子Src，Src作為β—catenin的上游信號(hào)分子，通過與β—catenin直接相互作用，導(dǎo)致β—catenin活化、入核。β—catenin的活化激活Erk分子，進(jìn)而上調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)NK細(xì)胞的存活。同時(shí)，F(xiàn)ibronectin并不能維持CD11b陰性的NK細(xì)胞以及β—catenin缺陷的NK細(xì)胞的體外存活。因此，我們發(fā)現(xiàn)Fibronectin通過CD1b/Src/β—catenin途徑活化E

4、RK上調(diào)Bcl-2的表達(dá)從而維持NK細(xì)胞的生存。 第二部分TLR4和TLR9配體誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性單核細(xì)胞通過膜結(jié)合型TGF—β和β—catenin通路誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryTcells，Treg)在抑制機(jī)體免疫反應(yīng)和阻止有害的自身免疫應(yīng)答中具有重要的作用。在免疫應(yīng)答后期，Treg可以削弱效應(yīng)性T細(xì)胞的功能，將免疫應(yīng)答控制在一定限度內(nèi)。許多流行病學(xué)研究以及實(shí)驗(yàn)研究提示一些To11樣受體(TL

5、R)激動(dòng)劑在自身免疫性疾病和哮喘的發(fā)病中具有保護(hù)作用。宿主持續(xù)性暴露于低劑量TLR激動(dòng)劑后有助于維持體內(nèi)一定數(shù)量的CD4+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，從而維持了機(jī)體的免疫自穩(wěn)。我們也發(fā)現(xiàn)在清潔環(huán)境(CL)中野生型小鼠體內(nèi)Treg細(xì)胞的比例高于TLR4—/—，TLR9—/—小鼠，而在SPF環(huán)境中三種小鼠體內(nèi)Treg的比例相當(dāng)，均為清潔環(huán)境中TLR4—/—，TLR9—/—小鼠水平，但當(dāng)TLR4和TLR9配體作用野生型小鼠后其體內(nèi)Treg細(xì)胞比

6、例升高。然而TLR信號(hào)調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞表達(dá)Foxp3的細(xì)胞和分子機(jī)制仍不為人所知。在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)TLR4和TLR9信號(hào)激活后，體內(nèi)出現(xiàn)一群具有調(diào)節(jié)功能的新型單核細(xì)胞亞群(Gr-1highLy-6Cint)，該新型Gr-1highLy-6Cint單核細(xì)胞亞群參與誘導(dǎo)外周Treg的生成。TLR4和TLR9激動(dòng)劑作用后，機(jī)體通過釋放一氧化氮(NO)從骨髓動(dòng)員一群Ca-1highLy-6Cint單核細(xì)胞入外周血同時(shí)上調(diào)其表達(dá)膜表面TGF

7、—β(mTGF—β)。Gr-1highly-6Cint單核細(xì)胞膜表面TGF—β可以促進(jìn)β—catenin入核、活化STAT3、進(jìn)而STAT3誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞表達(dá)Foxp3。而與對(duì)照相比，β—catenin缺陷的CD4+CD25T細(xì)胞并不能在Ca-1highLy-6Cint單核細(xì)胞作用下分化為Treg細(xì)胞。另外，我們建立DSS誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病(IBD)模型，發(fā)現(xiàn)在清潔環(huán)境中TLR4—/—、TLR9—/—小鼠比野生型小鼠更易