金屬硫蛋白與肝星狀細(xì)胞MMP-2表達(dá)及活性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：研究金屬硫蛋白(Metallothionein,MT)在體內(nèi)及體外與MMP-2表達(dá)、活性之間的相關(guān)性。 方法：昆明種雄性成年小鼠50只,其中實(shí)驗(yàn)鼠40只,對照鼠10只,用CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型,每5天給藥1次,持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)組每周末隨機(jī)處死5只小鼠,對照組處死1只,留取肝組織備用。向肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSCs)條件培養(yǎng)基(含有MMP-2)中加不同濃度MT,使之與MMP-2酶學(xué)共

2、浴,檢測MMP-2活性。肝星狀細(xì)胞和肝細(xì)胞共培養(yǎng),加入不同的濃度的CdCl_2,誘導(dǎo)MT產(chǎn)生增加,檢測MMP-2在RNA和蛋白水平的表達(dá)變化。制作小鼠肝組織芯片,天狼猩紅染色判斷肝纖維化程度。免疫組化法測肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)、MT蛋白表達(dá),酶圖法測鼠肝組織勻漿和培養(yǎng)基中MMP-2活性。 結(jié)果：①模型組小鼠肝臟在實(shí)驗(yàn)早期呈暗紅色或紅黃相間,8周末肝臟表面粗糙有小

3、結(jié)節(jié),質(zhì)地較韌,體積縮小。HE染色光鏡檢查發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)早期,模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)廣泛脂肪變性和水樣變性及點(diǎn)狀壞死,8周末可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,伴不同程度的肝細(xì)胞脂肪變性,匯管區(qū)變寬,纖維組織大量增生,形成寬窄不一的纖維間隔。天狼猩紅染色顯示模型組小鼠肝組織隨造模周數(shù)的增加,膠原纖維沉積增多并逐步形成細(xì)小的纖維間隔。②模型組小鼠肝組織MMP-2和MT蛋白表達(dá)水平均隨纖維化進(jìn)展而呈波浪式交替升高,但二者時(shí)相變化相反。③模型組小鼠肝組織MMP-2活性

4、隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加而逐漸升高,亦有波動(dòng)。除個(gè)別時(shí)間點(diǎn)外,酶活性與MT表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。④肝星狀細(xì)胞條件培養(yǎng)基與不同濃度的MT直接作用后,MMP-2活性隨MT濃度增加活性逐漸降低(r=-0.9990,P<0.01)。⑤肝星狀細(xì)胞不論單獨(dú)培養(yǎng)還是與肝細(xì)胞共培養(yǎng),當(dāng)加入不同濃度的MT誘導(dǎo)劑后,MMP-2在RNA和蛋白水平表達(dá)均呈劑量依賴性下降(r_3=-0.922,r_4=-0.906),但共培養(yǎng)組下降更為明顯。 結(jié)論：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,在