PCR檢測大鼠血液及腹水中細菌DNA對腸道吻合口漏的早期診斷價值.pdf

1、研究背景:吻合口漏是腸道手術術后一組嚴重的并發(fā)癥，各家報告其發(fā)生率不一，國外報告結直腸瘺為4％-15％。一旦發(fā)生，病程變化很快，如不能及時診治，可出現(xiàn)繼發(fā)性腹膜炎、敗血癥、全身炎癥反應綜合征(SIRS)、多器官功能衰竭(MOF)等并發(fā)癥，危及生命。因此，早期診斷與及時處理吻合口漏是改善預后、降低疾病死亡率的關鍵。吻合口漏早期發(fā)生隱匿，目前仍缺乏有效的早期診斷方法，往往是通過后期典型腸瘺的臨床表現(xiàn)才得以確診。尋找一個既符合臨床需要，又簡便

2、迅速、準確客觀的方法，從而能有效輔助吻合口漏的早期診斷，一直是眾多研究者關注的焦點和從事胃腸臨床工作者的一種渴求。本實驗利用wistar大鼠建立不同腸段的常規(guī)腸切除腸吻合及腸漏模型，應用PCR技術動態(tài)檢測大鼠血液及腹水中細菌DNA(大腸桿菌的lacZ基因和多數(shù)細菌共有的16SrRNA基因)，研究不同樣本的lacZ基因和16SrRNA基因的PCR檢測對空、回、結腸腸吻合口早期診斷的價值。 目的:研究與探討應用PCR檢測大鼠血液及腹

3、水中細菌DNA對腸道吻合口漏的早期診斷價值。 方法:健康wistar雌性大鼠65只，隨機分成：A組(n=5)為假手術組，只翻動腸管，不行特殊處理；B組(n=10)為結腸-結腸吻合組，C組(n=10)為結腸吻合口漏組，兩組在距回盲部以下約10cm處用血管鉗阻斷約3cm長結腸腸管的血流并用0號線結扎血管，斜形切除此段腸管后，B組用0號絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，C組用0號線行后壁和兩側壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合；D組(

4、n=10)為空腸-空腸吻合組，E組(n=10)為空腸吻合口漏組，F(xiàn)組(n=10)為回腸-回腸吻合組，G組(n=10)為回腸吻合口漏組，D、E兩組于Treitz韌帶以下15cm處用血管鉗阻斷約3cm長腸管的血流，0號線結扎血管，斜形切除此段腸管，D組用0號絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，E組用0號線行后壁和兩側壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合。F、G組于回盲部以上約15cm處用血管鉗阻斷約3cm長腸管的血流并用0號線結扎血管，斜形切除

5、此段腸管后，F(xiàn)組用0號絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，G組均用0號線行后壁和兩側壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合。其中B、C兩組構成Ⅰ大組，為結腸吻合口實驗組，D、E、F、G構成Ⅱ大組，為空、回腸吻合口實驗組。A組和第Ⅰ組于術后第3天及術后第6天取靜脈血1mL和3mL。第Ⅱ組于術后36小時取靜脈血1mL，術后72小時取血3mL及腹水1-2mL。以酚抽提法提取血液及腹水中DNA，PCR擴增大腸桿菌的lacZ基因和細菌共有的16SrRN

6、A基因，所得數(shù)據(jù)行卡方檢驗處理，取腸管標本HE染色做病理學檢查，觀察其在不同吻合情況下的損傷程度。 結論: 1、以PCR方法檢測術后外周血中大腸桿菌lacZ基因對結腸吻合口漏的診斷有一定的意義，而以PCR血中細菌16SrRNA基因對結腸吻合口漏的意義不大。 2、以PCR方法檢測術后外周血中大腸桿菌lacZ基因對空、回腸吻合口漏的意義不大，PCR檢測術后腹水中l(wèi)acZ基因對空、回腸吻合口漏的診斷均有意義，且與外周血

7、相比，能較大提高空、回腸吻合口漏的診斷率。 3、以PCR方法檢測術后外周血和腹水中細菌16SrRNA基因對空、回腸吻合口漏的診斷均有一定意義，但使用腹水標本與外周血進行檢測相比，不能顯著提高空、回腸吻合口漏的診斷率。 4、以術后外周血為標本對空、回腸吻合口漏的診斷中，PCR檢測細菌16SrRNA基因的意義較大，可能優(yōu)于以PCR檢測大腸桿菌的lacZ基因，而以術后腹水為標本時，兩組靶基因的差異不大；以術后外周血為標本對結腸