賴氨酰氧化酶家族成員在關(guān)節(jié)軟骨不同分區(qū)中的表達(dá).pdf

1、關(guān)節(jié)軟骨是一種特殊的結(jié)締組織，因不含有血管、神經(jīng)和淋巴管，一旦損傷后自身修復(fù)困難。關(guān)節(jié)軟骨損傷后的修復(fù)一直是骨科臨床醫(yī)生面臨的重大難題。目前研究顯示關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（ExtracellularMatrix，ECM）特別是膠原纖維的三維立體結(jié)構(gòu)，對(duì)維持關(guān)節(jié)軟骨生物力學(xué)完整性起著重要的作用。
　　 賴氨酰氧化酶（Lysyl Oxidase，LOX）在關(guān)節(jié)軟骨中的發(fā)現(xiàn)提示它可能對(duì)關(guān)節(jié)軟骨生物力學(xué)特性的形成和維持起著重要作用。LOX作

2、用于ECM中的膠原和彈性蛋白，使其發(fā)生共價(jià)交聯(lián)，有穩(wěn)定ECM的作用。目前已發(fā)現(xiàn)除LOX以外的其它四個(gè)同工酶：類賴氨酰氧化酶1-4（Lysyl Oxidase-Likel-4，LOXL1-4），這五個(gè)成員組成了LOX蛋白酶家族，它們具有相同的酶作用機(jī)制。為了了解LOX家族成員對(duì)關(guān)節(jié)軟骨膠原交聯(lián)的作用機(jī)制，通過測(cè)定不同分區(qū)關(guān)節(jié)軟骨中LOX家族成員的表達(dá)，初步探討LOX蛋白酶家族對(duì)不同分區(qū)關(guān)節(jié)軟骨膠原交聯(lián)的影響。
　　 方法：

3、　　 1.自屠宰場(chǎng)獲取6個(gè)新鮮成年牛股骨髁，分別切取內(nèi)側(cè)滑車全層軟骨塊，大小10×80mm，以DMEM（Dulbecco's Modified Eagle'sMedium）+10％胎牛血清（Fetal Bovine Serum，F(xiàn)BS），4℃保存，24小時(shí)內(nèi)分區(qū)提取RNA。
　　 2.將所獲得的全層關(guān)節(jié)軟骨塊分為3區(qū)：淺表區(qū)、過渡區(qū)和深區(qū)。確定淺表區(qū)和過渡區(qū)軟骨厚度為300μm，剩余軟骨為深區(qū)，分區(qū)切取每區(qū)軟骨，共18個(gè)樣本。

4、
　　 3.應(yīng)用RT-PCR和Real Time-PCR技術(shù)測(cè)定每一區(qū)關(guān)節(jié)軟骨中LOX家族成員mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.以3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參照，瓊脂糖凝膠電泳顯示LOXL1和LOXL3無表達(dá)，LOX、LOXL2和LOXL4在每區(qū)軟骨中均有表達(dá)且LOXL2表達(dá)最高。
　　 2.以深區(qū)為參

5、照，Real Time-PCR定量測(cè)定顯示關(guān)節(jié)軟骨中LOXL1和LOXL3無表達(dá)，LOX和LOXL2在淺表區(qū)含量最高，深區(qū)含量最低；LOXL4在淺表區(qū)含量最高，過渡區(qū)含量最低；LOXL2在淺表區(qū)、過渡區(qū)和深區(qū)的含量均高于其它成員。單因素方差對(duì)LOX、LOXL2和LOXL4的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，不同分區(qū)間和不同成員間比較有顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過對(duì)關(guān)節(jié)軟骨中LOX蛋白酶家族系統(tǒng)地分析，發(fā)現(xiàn)LOX