大豆馴化相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、1、在蛋白提取、雙向電泳上樣量和等電聚焦程序方面對適于大豆葉片蛋白質(zhì)組學(xué)研究的雙向電泳技術(shù)進行了改進：改進的TCA/丙酮法能促進蛋白質(zhì)復(fù)溶；蛋白上樣量增加至450μg可使低峰度蛋白得到更好的顯現(xiàn)；在等電聚焦程序中采用10小時低電壓除鹽可獲得更佳的聚焦效果。改進后的方法獲得的栽培和野生大豆葉片蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜重復(fù)性好，經(jīng)ImageMaster軟件匹配，同組樣品組內(nèi)匹配率超過80％；不同樣品電泳圖譜可比性高，組間匹配率接近或超過80％。

2、 2、以改進后的方法對栽培和野生大豆葉片(各17個品種的葉片混合制成樣品)進行雙向電泳實驗。電泳圖譜利用ImageMaster軟件分析，每張凝膠上平均找到668個置信蛋白質(zhì)點，對所有匹配蛋白質(zhì)點按Ratio值>1.5篩選，同時進行T檢驗分析(p<0.05)尋找顯著差異的蛋白質(zhì)：絕大多數(shù)蛋白無顯著差異，占栽培和野生組可匹配蛋白質(zhì)點總數(shù)的96.55％；在栽培和野生組間共找到了23個差異顯著的蛋白質(zhì)點，占總數(shù)的3.45％。其中，栽培表達

3、量上調(diào)的點有12個，下調(diào)的點11個，分別占總數(shù)的1.80％和1.65％。另外，通過ImageMaster軟件和人工肉眼分析比對，未能在栽培或野生群體中發(fā)現(xiàn)群體特有的蛋白。我們推論，馴化帶來的差異體現(xiàn)在少數(shù)蛋白質(zhì)表達量的變化上。 3、選取10個主要的差異蛋白質(zhì)點進行單級質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)，均打出高質(zhì)量的峰圖，用Mascot檢索程序?qū)CBInr蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進行全庫搜索，均獲得了相關(guān)蛋白或同源蛋白陽性報告(p<0.