利用大豆低值蛋白開(kāi)發(fā)大豆肽.pdf

1、大豆肽是大豆蛋白水解后產(chǎn)生的有生理活性的小分子短肽鏈，具有優(yōu)良的加工特性和生理功能，是大豆深加工的一個(gè)重要方向。利用微生物發(fā)酵制備大豆肽，具有酸解和酶解法生產(chǎn)所不具備的很多優(yōu)點(diǎn)。本課題主要對(duì)菌種的選育、發(fā)酵工藝的優(yōu)化和發(fā)酵液的分離純化分析等幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行初步研究。
　　 選用實(shí)驗(yàn)室保存的米曲霉Asp3.042作為初始發(fā)酵菌種，對(duì)其產(chǎn)蛋白酶性狀進(jìn)行選育。利用浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作核所的輻照源對(duì)米曲霉進(jìn)行誘變育種，在初篩的過(guò)程中，以透

2、明圈直徑大小作為初選指標(biāo)，經(jīng)過(guò)觀察透明圈直徑大小，并重復(fù)篩選得到17株誘變菌株，其菌落生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的透明圈比原始菌株大，表明在誘變過(guò)程中其分泌蛋白酶的能力發(fā)生突變，而有部分菌株生長(zhǎng)性狀也發(fā)生了改變。在進(jìn)一步復(fù)篩的研究中，發(fā)現(xiàn)初篩得到的誘變菌株發(fā)酵4天的蛋白酶酶活和發(fā)酵8天的粗肽含量基本上都比原始菌株高，其中編號(hào)A-9的菌株其發(fā)酵得到的粗肽含量最高，是誘變得到的最佳菌株。
　　 利用豆渣進(jìn)行米曲霉產(chǎn)孢子的固體發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，對(duì)固體發(fā)酵

3、培養(yǎng)基中豆渣、麩皮、水分、KH2PO4、MgSO4的含量進(jìn)行單因素試驗(yàn)。在優(yōu)化分析后，選擇米曲霉固體發(fā)酵產(chǎn)孢培養(yǎng)基組成比例為：豆渣8g，麩皮2g，水份20g，蔗糖5.5g，KH2PO40.3g，MgSO40.05g。在豆渣固體培養(yǎng)基優(yōu)化條件下發(fā)酵培養(yǎng)米曲霉孢子，計(jì)孢子數(shù)接近3.0×108個(gè)/ml，能夠達(dá)到較好的培養(yǎng)效果。且米曲霉菌絲在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)24h后固體培養(yǎng)基表面就長(zhǎng)出白色的菌絲，在2-3天的發(fā)酵培養(yǎng)后，米曲霉菌絲顏色轉(zhuǎn)為

4、黃綠色并生成分生孢子體，一般培養(yǎng)4天左右固體培養(yǎng)基表面長(zhǎng)滿綠色的孢子。
　　 收集固體培養(yǎng)的米曲霉孢子，稀釋至0.5×108個(gè)/ml，接種制豆腐皮后剩余的豆?jié){(下漿水)進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，利用液體發(fā)酵制備大豆粗肽。采用響應(yīng)面法對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，首先用Plackett.Burman(PB)設(shè)計(jì)對(duì)培養(yǎng)基中相關(guān)影響因素的效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，篩選出3個(gè)有顯著影響效應(yīng)的因素，分別為KH2PO4、蔗糖、麩皮。然后進(jìn)行最

5、陡爬坡實(shí)驗(yàn)逼近最佳響應(yīng)面區(qū)域，最后通過(guò)Box-Behnken設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析確定了主要影響因素的最佳濃度，為KH2PO4：1.18％，蔗糖：0.24％，麩皮：1.81％，MgSO4：0.2％，NaCl：0.2％，CaCO3：0.02％，吐溫：0.05％，起始pH值7。在優(yōu)化條件下發(fā)酵8d，粗肽得率達(dá)到63.31％，含量比發(fā)酵前提高了4倍。
　　 在最優(yōu)液體培養(yǎng)基條件下，對(duì)發(fā)酵不同時(shí)間的發(fā)酵提取液測(cè)定每毫升樣品的總抗氧化能力，實(shí)驗(yàn)

6、發(fā)現(xiàn)隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，每毫升發(fā)酵液的抗氧化能力也不斷增強(qiáng)。說(shuō)明發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵原料中的大分子大豆蛋白被發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的蛋白酶分解成短肽，提高了發(fā)酵液的抗氧化能力。
　　 對(duì)發(fā)酵8天的發(fā)酵液進(jìn)行離心提取上清液后，進(jìn)行超濾分離，得到分子量分別在小于1000Da、1000-5000Da、5001-10000Da和10000Da以上的四個(gè)截留片段，其中大于10000Da的大分子物質(zhì)抗氧化能力弱，1000-5000Da和5001-1000