骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腎小管間質(zhì)纖維化大鼠模型中腎臟分布的研究.pdf

1、目的：腎小管間質(zhì)纖維化(TIF)是進(jìn)行性腎臟損害的主要病理學(xué)特征，是幾乎所有腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎功能衰竭的共同路徑。完全阻斷TIF是治療的臨床難題。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在適宜的條件下可分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等，由于其取材容易，能穩(wěn)定表達(dá)目的基因表型，耐受機(jī)體免疫，無致瘤性，為疾病移植治療提供了新的途徑。研究證實(shí)急性腎臟損傷小鼠模型中，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以分化為正常腎臟細(xì)胞促進(jìn)結(jié)構(gòu)修復(fù)、改善腎功能。本研究探討體外擴(kuò)增

2、及鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法；采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎建立大鼠TIF模型；TIF早期經(jīng)鼠尾靜脈注射擴(kuò)增的間充質(zhì)干細(xì)胞，了解間充質(zhì)干細(xì)胞是否可以在纖維化微環(huán)境下靶向定位于梗阻的腎臟，為今后的研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：①細(xì)胞分離純化：貼壁細(xì)胞分離法和密度梯度離心法相結(jié)合分離純化SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。②細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長及形態(tài)；MTT法測定P1、P3、P6代細(xì)胞生長曲線；細(xì)胞爬片行糖原染色、堿性磷酸酶染色

3、；免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記物CD31、CD44、CD45、CD90的表達(dá)；傳代細(xì)胞用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉和維生素C的條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化，VonKossa染色觀察細(xì)胞鈣化結(jié)節(jié)。③細(xì)胞腺病毒轉(zhuǎn)染：綠色熒光蛋白(GFP)基因的重組腺病毒載體感染間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)染效率。④大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)后7天，經(jīng)鼠尾靜脈注射GFP(+)間充質(zhì)干細(xì)胞。分別在移植后2周和4周隨機(jī)處死大鼠，對腎臟組織進(jìn)行病理學(xué)分析。石蠟切片