腫瘤壞死因子-α對(duì)NIH3T3細(xì)胞成熟化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑中特異性激酶抑制劑對(duì)NIH3T3細(xì)胞成熟化所起的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)NIH3T3成纖維細(xì)胞，將細(xì)胞分為空白對(duì)照組（A組）、TNFα組（B組）及TNF-α+Anti-TNFRSF1B組（C組）。細(xì)胞制成2×105/mL的細(xì)胞懸液后，接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，待細(xì)胞呈匯合狀態(tài)時(shí)，換用無血清DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)12～16h。然后A組換用含體積分?jǐn)?shù)為0.02胎牛血清的DM

2、EM高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；B組換用含100μg/LTNF-α的培養(yǎng)基培養(yǎng);C組先加入濃度為50μg/L的Anti-TNFRSF1B作用于細(xì)胞th后，倒出培養(yǎng)基后再加入含100μg/LTNFα的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。然后采用RT-PCR法測(cè)定各組Ⅰ型膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)mRNA的表達(dá)，WesternBlot法測(cè)定各組Ⅰ型膠原蛋白和MMP3蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：MMP3無論是mRNA還是蛋白的表達(dá)B組和C組與A組相比均有顯

3、著性差異(t=-13.413～5.076，P＜0.05)。其中B組與C組相比，差異也具有顯著性(t=4.441～5.076，P＜0.01)；Ⅰ型膠原二者的表達(dá)B組和C組與A組相比也均有顯著性差異(t=-4.950～5.808，P＜0.05)，B組與C組比較，差異顯著(t=-4.950～-3.823.P＜0.05)。
　　 結(jié)論：與對(duì)照組相比，經(jīng)TNF-α干預(yù)后，NIH3T3成纖維細(xì)胞中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)明顯減少，而MMP3的表達(dá)量