柔肝抑纖飲對(duì)血吸蟲病小鼠早期肝纖維化形成的干預(yù)作用及加用二至丸后的對(duì)比研究.pdf

1、目的：1.以秋水仙堿為對(duì)照藥物，觀察中藥復(fù)方柔肝抑纖飲水煎劑對(duì)血吸蟲病小鼠早期肝纖維化形成的影響并比較兩組的療效差別。2.考察中藥復(fù)方柔肝抑纖飲加用二至丸后在抗小鼠早期肝纖維化形成方面與單獨(dú)使用柔肝抑纖飲有無差別，明確加用二至丸后對(duì)原方有無增效、協(xié)同作用，并探討其作用機(jī)制。 方法：1.實(shí)驗(yàn)一：建立小鼠血吸蟲性肝纖維化模型，將動(dòng)物隨機(jī)分組：A組(空白對(duì)照組)；B組(感染未治療組)；C組(吡喹酮組)；D組(柔肝抑纖飲組)；G組(秋水

2、仙堿組)。除A組外，B、C、D、G組均人工感染日本血吸蟲尾蚴，自感染第21天開始，D組每天灌服柔肝抑纖飲濃縮水煎液，G組每天灌服秋水仙堿，A、B、C組灌服生理鹽水，連續(xù)40天。期間，C組、D組、G組在感染后第45天時(shí)，分別予以吡喹酮一次性灌胃殺蟲處理。于感染后第61天，處死動(dòng)物。檢測肝功能(ALT、ALB)，血清肝纖維化指標(biāo)(PCⅢ、HA)，肝組織HYp，進(jìn)行肝臟病理組織學(xué)觀察(HE染色、VG膠原染色、電鏡下竇周隙超微結(jié)構(gòu)、免疫組化染色

3、觀察并測定肝組織Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的表達(dá))。2.實(shí)驗(yàn)二：建立小鼠血吸蟲性肝纖維化模型，將動(dòng)物隨機(jī)分組：A組(正常對(duì)照組)；C組(吡喹酮組)；D組(柔肝抑纖飲組)；E組(柔肝抑纖飲+二至丸組)。除A組外，C、D、E組每只小鼠均人工感染日本血吸蟲尾蚴，自感染第21天開始，D組每天灌服柔肝抑纖飲濃縮水煎液，E組每天灌服柔肝抑纖飲+二至丸濃縮水煎液，A、C組灌服生理鹽水，連續(xù)40天。期間，C組、D組、E組在感染后第45天時(shí)，分別予以吡喹酮一次性

4、灌胃殺蟲處理，于感染后第61天，處死動(dòng)物。檢測肝功能(ALT、ALB)，血清肝纖維化指標(biāo)(PCⅢ、HA)，肝組織HYp，進(jìn)行肝臟病理組織學(xué)觀察(HE染色、VG膠原染色、電鏡下竇周隙超微結(jié)構(gòu)、免疫組化染色觀察并測定肝組織TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的表達(dá))。 結(jié)果：1.柔肝抑纖飲組與秋水仙堿組比較，在肝脾臟器系數(shù)，降低ALT，升高ALB，降低HA，肝組織膠原染色(VG)，減少Ⅰ型膠原的表達(dá)等方面未見顯著性差異(P＞

5、0.05)；而在對(duì)血清肝纖維化指標(biāo)如PCⅢ、HYp，以及Ⅲ型膠原積分光密度等的改善方面，柔肝抑纖飲優(yōu)于秋水仙堿(P＜0.05)。反映出中藥復(fù)方抗血吸蟲性肝纖維化具有一定的作用優(yōu)勢。在吡喹酮?dú)⑾x處理的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用柔肝抑纖飲或秋水仙堿對(duì)血吸蟲病小鼠早期肝纖維化的形成都有一定的抑制和阻斷作用，柔肝抑纖飲的整體療效不低于秋水仙堿，有望取代秋水仙堿，成為抗血吸蟲性肝纖維化的良藥。2.柔肝抑纖飲+二至丸組與柔肝抑纖飲組比較，在小鼠脾臟臟器系數(shù)、降

6、低血清ALT水平，降低血清HA、PCⅢ水平，減少Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達(dá)等方面，均明顯優(yōu)于吡喹酮組(P＜0.05，P＜0.01)，但柔肝抑纖飲+二至丸組與柔肝抑纖飲組兩組間比較未見顯著性差異(P＞0.05)，結(jié)合病理組織學(xué)觀察結(jié)果，提示兩方對(duì)血吸蟲性肝纖維化的形成都有較好的阻斷和抑制作用。柔肝抑纖飲加用二至丸后，在小鼠肝臟臟器系數(shù)，升高ALB水平，降低肝組織HYp含量，肝組織膠原染色(VG)百分比含量，以及下調(diào)TGF-β1、α-SMA的

7、表達(dá)等方面優(yōu)于柔肝抑纖飲原方，兩組相比差異顯著(P＜0.05)；另外，與柔肝抑纖飲組比較，柔肝抑纖飲+二至丸組肝組織Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原積分光密度均值也呈現(xiàn)降低趨勢，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理未見顯著差異(P＞0.05)。 結(jié)論：1.以中醫(yī)學(xué)臟腑辨證理論和絡(luò)病理論為指導(dǎo)，參閱近年來慢性肝病肝纖維化臨床和實(shí)驗(yàn)研究的國內(nèi)外文獻(xiàn)，結(jié)合導(dǎo)師多年的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，提出肝纖維化的病機(jī)特點(diǎn)為本虛標(biāo)實(shí)，病情的持續(xù)發(fā)展與“本虛”和“標(biāo)實(shí)”兩方面都有關(guān)系，標(biāo)實(shí)體現(xiàn)在

8、氣滯、濕熱、痰濁、瘀血、蟲毒壅塞肝絡(luò)；本虛主要反映在肝脾腎三臟的氣血陰精不足，令肝體失柔。肝纖維化的病位在肝絡(luò)；濕熱疫毒或蟲毒侵襲肝絡(luò)是發(fā)病的始動(dòng)因素；瘀阻肝絡(luò)為肝纖維化發(fā)生的主要病理環(huán)節(jié)；絡(luò)虛不榮是病變遷延難愈的內(nèi)在原因；HSC活化增殖和TGF-β1的異常表達(dá)是肝臟ECM的合成增多，降解減少，致ECM在肝內(nèi)大量沉積的主要機(jī)制。 2.確立以養(yǎng)陰柔肝，活血通絡(luò)為主要治法的中藥復(fù)方柔肝抑纖飲，選擇血吸蟲性肝纖維化動(dòng)物模型，以秋水仙堿

9、為陽性對(duì)照藥物進(jìn)行干預(yù)血吸蟲性小鼠早期肝纖維化形成的研究，結(jié)果提示在吡喹酮?dú)⑾x處理的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用柔肝抑纖飲或秋水仙堿對(duì)血吸蟲病小鼠早期肝纖維化的形成都有一定的抑制和阻斷作用，柔肝抑纖飲的整體療效不低于秋水仙堿，有望取代秋水仙堿，成為抗血吸蟲性肝纖維化的良藥。 3.柔肝抑纖飲的作用機(jī)制與下調(diào)TGF-β1表達(dá)，抑制HSC活化、增殖，從而減少了Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原等ECM在肝內(nèi)的合成與沉積有關(guān)。 4.二至丸與柔肝抑纖飲配和應(yīng)用