十溴聯(lián)苯醚上調(diào)MAPKs蛋白并損傷血睪屏障的研究.pdf

1、目的：
　　探索雄性ICR暴露十溴聯(lián)苯醚（decabromodiphenyl ether,BDE-209）對(duì)小鼠睪丸MAPK通路相關(guān)蛋白、血睪屏障緊密連接蛋白Claudin-11以及血睪屏障超微結(jié)構(gòu)的影響；此外，還對(duì)不同濃度BDE-209染毒處理SerW3細(xì)胞 MAPK通路相關(guān)蛋白和緊密連接蛋白Claudin-11表達(dá)水平影響進(jìn)行初步研究，為闡明BDE-209的雄性生殖毒性機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中

2、，4周齡雄性ICR小鼠，52只，體重15～21克，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，隨機(jī)分為4組，即溶劑對(duì)照組（0mg/kg BW）、低劑量組（100mg/kg BW）、中劑量組（300mg/kg BW）和高劑量組（500mg/kg BW），每組13只，經(jīng)灌胃染毒6周后處死，冰浴情況下分離臟器、稱重，然后將生物樣本保存于-80℃超低溫冰箱直至檢測(cè)。對(duì)睪丸組織進(jìn)行HE染色進(jìn)行光鏡觀察以及電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)；Western Blot方法檢測(cè)小鼠睪丸MAPKs通

3、路中的相關(guān)蛋白（p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK）和Claudin-11表達(dá)變化；
　　體外實(shí)驗(yàn)中，用不同濃度BDE-209（0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml和40μg/ml）處理SerW3，24h后觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT方法檢測(cè)細(xì)胞存活百分率、LDH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳酸脫氫酶毒性、Western Blot方法檢測(cè)MAPK通路相關(guān)蛋白（p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、

4、p-JNK）和血睪屏障緊密連接蛋白Claudin-11的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　BDE-209染毒處理雄性ICR小鼠6周后，發(fā)現(xiàn)各劑量組雄性ICR小鼠的體重增加緩慢，從第三周開始，中劑量組和高劑量組小鼠的體重具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），小鼠睪丸系數(shù)和附睪系數(shù)顯著降低（P<0.05）。HE染色發(fā)現(xiàn)隨著染毒劑量加大，睪丸輸精管中的精子數(shù)目明顯減少，睪丸支持細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞排列不緊密，支持細(xì)胞間間隙增寬，間質(zhì)細(xì)胞間隙明顯增

5、寬，生精細(xì)胞間隙增大，支持細(xì)胞數(shù)、生精細(xì)胞數(shù)以及間質(zhì)細(xì)胞數(shù)顯著減少。超微結(jié)構(gòu)結(jié)果表明，與溶劑對(duì)照組相比，劑量組出現(xiàn)明顯支持細(xì)胞緊密連接解體、斷裂。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均顯示，MAPKs通路中p-p38/p38和p-JNK/JNK值顯著增加，差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義（P<0.05）；以及Claudin-11的表達(dá)顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　BDE-209可以引起睪丸組織和SerW3細(xì)胞中MAPKs通路相關(guān)蛋白表達(dá)增加、Cla