低分子肝素化內(nèi)皮抑素抑制兔角膜新生血管的實驗研究.pdf

1、分類號：R77上密級：U單位代碼：10422學(xué)號：2一zf肋占2◎∥簍只孥碩士學(xué)位論文ShandongUniversityMaster臺Thesis論文題目：低私即素化崢皮唧未，坼到崩睫撕弦血’％嚷矜研鈾作者姓名：季招女司7)專業(yè)：閆艮料I挈h指導(dǎo)教師姓名：vd專業(yè)技術(shù)職務(wù)：教授q價SifS瑪穢B山東大學(xué)碩士學(xué)位論文低分子肝素化內(nèi)皮抑素抑制免角膜新生血管的實驗研究研究生：李招娜導(dǎo)師：牟國營中文摘要目的：內(nèi)皮抑素是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性血

2、管內(nèi)皮細胞增殖的強效抑制劑。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮抑素能特異性抑制處于增殖狀態(tài)的新生血管內(nèi)皮細胞，并伴有誘導(dǎo)凋亡的作用。然而最近的1期臨床試驗研究結(jié)果表明，內(nèi)皮抑素體內(nèi)半衰期短，生物利用度低。如果能夠通過一定的手段提高其生物利用度、延長其體內(nèi)半衰期以減少給藥劑量或延長給藥周期，將會大大提高內(nèi)皮抑索的治療效果，促進其在臨床上的應(yīng)用。本課題將運用低分子肝素對內(nèi)皮抑素進行結(jié)構(gòu)修飾，并重點觀察低分子肝素化內(nèi)皮抑素抑制堿燒傷誘導(dǎo)的兔角膜新生血管(CNV)的

3、效果，探討其作用機制。方法：1內(nèi)皮抑素的分離純化取含內(nèi)皮抑素基因畢赤酵母菌表達上清液，經(jīng)纖維素交換劑CMII離子交換層析柱和Sephadex650凝膠過濾層析柱，分離純化得到電泳單點純的內(nèi)皮抑素，并通過MT丁比色法測定了其抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HEUCV)增殖的活性2LMWH對內(nèi)皮抑索的修飾采用高碘酸氧化法活化LMWH，制得的LM朔活化液于pH95、03mol／L的NaCONaHCOa緩沖液中對內(nèi)皮抑素進行化學(xué)修飾。通過SOS—PAGE

4、電泳監(jiān)測修飾反應(yīng)過程，比較不同時間點修飾液的自由氨基修飾率、活性保留百分率以及比較電泳監(jiān)測結(jié)果確定LMwH修飾內(nèi)皮抑素的修飾時間為48h。將修飾反應(yīng)液經(jīng)預(yù)處理后，使用SephadexG50凝膠過濾層析柱迸行分離純化，并進行了電泳鑒定監(jiān)測內(nèi)皮抑素及LMWH—ES在25“C和37“C水浴中的熱穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)修飾后的內(nèi)皮抑素較未修飾的熱穩(wěn)定性有明顯的提高。3低分子J旰素化內(nèi)皮抑素對兔角膜新生血管的抑制作用取新西蘭白兔30只，將浸有l(wèi)taol幾氫