基底細(xì)胞樣乳腺癌中KLK5基因的差異表達(dá)及調(diào)控分析.pdf

1、[研究背景]
　　 研究表明在基因或蛋白表達(dá)方面有一個(gè)或多個(gè)基因表達(dá)的變化與預(yù)后相關(guān)，并被用于乳腺癌的治療。雖然許多有統(tǒng)計(jì)意義的相關(guān)性已經(jīng)確定，但絕大多數(shù)還不足以很好地應(yīng)用在臨床上，因?yàn)檫@些基因當(dāng)中許多和已知的一些生物學(xué)標(biāo)志有關(guān)(如ER、HER2、Ki67)，并且細(xì)胞或腫瘤的生物學(xué)行為是由許多基因協(xié)調(diào)表達(dá)的，這也使得我們不太可能由一個(gè)或幾個(gè)基因的分析就能精確的預(yù)測已知腫瘤的臨床行為。基于DNA芯片的全基因組表達(dá)分析被用于轉(zhuǎn)錄組研

2、究，從而鑒定新的預(yù)后和預(yù)測因子，其中大量基于腫瘤基因表達(dá)譜評估的診斷報(bào)告已經(jīng)商業(yè)化?；虮磉_(dá)譜分析使得在基因組水平下對所有基因表達(dá)水平的評估成為可能。腫瘤細(xì)胞行為取決于細(xì)胞生長調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)模式和細(xì)胞行為其它重要方面的相互協(xié)調(diào)。因此，全基因組表達(dá)譜分析有助于腫瘤行為的預(yù)測，包括發(fā)生遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)的預(yù)測和對特殊治療反應(yīng)的預(yù)測。
　　 [研究目的]
　　 盡管基底細(xì)胞樣乳腺癌(basal-like breast canc

3、er BLBC)有特定的形態(tài)、遺傳及臨床特征，但其生物學(xué)行為及臨床療效上仍然存在許多差異。許多BLBC子群由于不能被正確鑒定而導(dǎo)致不正確的診斷和/或不適宜的治療。為了解基底細(xì)胞樣乳腺癌基因表達(dá)譜，它與其他亞型乳腺癌和正常乳腺組織中有明顯差異表達(dá)的基因探索作為診斷基底細(xì)胞樣乳腺癌的分子標(biāo)志和治療靶點(diǎn)的可能。
　　 [研究方法]
　　 總體樣本來源于上海長海醫(yī)院的84例乳腺浸潤性導(dǎo)管性癌患者?；颊叨际沁M(jìn)行了乳腺癌改良根治術(shù)和

4、腋窩淋巴結(jié)清掃，平均年齡49歲，手術(shù)前未接受其他任何治療。根據(jù)篩選要求選出48例，LuminalA/B(ER+，EP+，Her2/neu-)，HER2+(ER-，EP-，Her2/neu+)， basal-like(ER-，EP-，Her2/neu-，CK5+)挑選四種亞型各12例，同時(shí)在48例標(biāo)本中選出6例距離腫瘤組織邊緣至少5 cm的癌旁組織作為對照組。通過包含48804個(gè)探針的人類mRNA基因表達(dá)譜芯片比較48例各亞型乳腺癌和6例

5、正常乳腺組織基因表達(dá)譜。并通過熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)法進(jìn)行結(jié)果驗(yàn)證。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1.通過比較乳腺癌標(biāo)本和正常乳腺上皮組織的基因表達(dá)譜，顯示有99個(gè)基因明顯上調(diào)超過四倍差異，43個(gè)基因下調(diào)超過5倍差異。具有最高FC值的明顯上調(diào)和下調(diào)的基因，KLK5，ART3，F(xiàn)NDC1，CALB2等。雖然每個(gè)基因的定量變化在RT-PCR和基因芯片分析中不是完全相關(guān)的，但是這兩種檢測中基因上調(diào)和下調(diào)的趨勢是一致的

6、。它們具有不同的生物學(xué)分類。超過30％的基因編碼合成功能不明確的蛋白或不編碼合成任何蛋白。其他的70％基因通過GO分析編碼多種生物功能的蛋白，其功能與細(xì)胞粘附、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖和分化相關(guān)。
　　 為了從基因表達(dá)分析中獲得上訴結(jié)果的證實(shí)，我們選擇了36個(gè)上調(diào)和下調(diào)明顯的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因做熒光定量RT-PCR檢測:IGJ，HBB，MUCL1，HBA2，SLPI，DCD, EEF1A2, BAG4, AGR3,ESM1, TNNT

7、1, AGR3, PIGR, HBA2, CPB1, CGA,ASF1A, MSLN, TIGA1, FABP4, S100A7, CEL, DLK1, PNMT, PIP, TFF3, PTCHD1,MLPH, CITED4, FXA1,TNMD,RDH10, KLK5,ART3, FNDC1,CALB2。
　　 2.在上調(diào)基因中研究分析發(fā)現(xiàn)基因KLK5在BLBC中是顯著上調(diào)的，但KLK5基因在Luminal A、Lumina

8、lB、HER2過表達(dá)的乳腺癌組織與正常乳腺上皮細(xì)胞的基因表達(dá)譜中下調(diào)超過兩倍。通過研究基因表達(dá)譜顯示與正常乳腺組織相比，KLK5在LuminalA/B的亞型中、和HER2過表達(dá)亞型中低表達(dá)，而在BLBC中呈高表達(dá)，后通過RT-PCR檢測中得到進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)果。本研究采用的網(wǎng)絡(luò)信號傳導(dǎo)分析較好地解釋了KLK5的調(diào)控機(jī)理。研究分析表明KLK5可能與BLBC的形成、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，很可能成為BLBC一個(gè)的新的預(yù)測標(biāo)志和治療靶點(diǎn)。但仍