結(jié)外鼻型NK-T細胞淋巴瘤UBE1和p27表達與EB病毒感染關(guān)系研究.pdf

1、本研究分為四個部分：一、ENKL UBE1和p27蛋白表達及與EBV感染關(guān)系研究收集ENKL和同期鼻咽粘膜良性淋巴組織增生(BLP)標(biāo)本各48例，用免疫組化方法檢測UBEl和p27蛋白表達情況，原位雜交法檢測EBERs表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)88％ENKL表達UBE1，其中67％為強陽性，21％為弱陽性，12％為陰性表達；38％BLP表達UBE1，陽性細胞主要為淋巴濾泡生發(fā)中心細胞及少數(shù)濾泡間轉(zhuǎn)化的淋巴細胞，其中23％為強陽性表達，15％為弱陽性

2、表達，62％為陰性表達，陰性表達的病例生發(fā)中心內(nèi)見散在分布的UBE1陽性細胞，但陽性細胞數(shù)不到10％。48例BLP p27蛋白均呈陽性表達，陽性細胞分布在淋巴濾泡間細胞、套細胞和少數(shù)濾泡生發(fā)中心細胞；而大部分濾泡中心細胞和中心母細胞p27表達低下； 27％ENKL表達p27，其中12％強陽性，2例同時伴胞質(zhì)陽性，15％弱陽性，73％陰性。p27表達組預(yù)后較陰性組的好。90％ENKL表達EBERs，19％BLP可見少數(shù)EBERs陽性細胞，

3、但陽性細胞數(shù)均不到1％。ENKL UBE1表達與EBV感染狀況呈顯著正相關(guān)性(r=0.386，P=0.007)，與p27表達呈負相關(guān)而無統(tǒng)計學(xué)意義(r=．0.143，P=0.33)；p27表達與EBV感染狀況呈負相關(guān)但無統(tǒng)計學(xué)意義(r=．0.099，P：0.503)。 二、用RNAi方法下調(diào)EBNAl表達對EBV陽性HANK1細胞UBE1、p27基因表達的影響EBV核抗原1(EBNA1)表達于所有EBV相關(guān)性惡性腫瘤細胞中，EB

4、NA1對EBV潛伏感染基因組的復(fù)制，轉(zhuǎn)錄和附加體的維持至關(guān)重要，抑制EBNA1表達可抑制EBV復(fù)制。HANK1細胞株是日本Kagami等建立的NK/T細胞淋巴瘤細胞株。表達Ⅱ型EBV潛伏感染相關(guān)基因：EBERs，EBNA1和LMP1等。本研究用RNAi(RNA interference)方法抑制HANK1細胞EBNA1表達，實時定量RT-PCR和Western blot檢測相關(guān)基因表達情況，流式細胞儀檢測細胞周期分布和凋亡。 三

5、、下調(diào)UBE1表達對HANK1細胞p27、EBNA1表達的影響設(shè)計并合成針對UBE1 mRNA序列的siRNA(small interference RNA)雙鏈分子，瞬時抑制HANK1細胞UBE1基因表達，實時定量RT-PCR和Western blot 檢測相關(guān)基因表達，MTT法檢測細胞增殖。 四、蛋白酶體抑制劑對HANKl細胞UBE1、p27基因表達的影響。 用蛋白酶體抑制劑MG132處理細胞，MTT法檢測細胞增殖，

6、實時定量RT-PCR和Western blot檢測相關(guān)基因表達，流式細胞儀檢測細胞周期分布和凋亡。 結(jié)論：(1)大部分ENKLUBE1高表達，p27蛋白低表達并與EBV感染有關(guān)；(2)部分EBV相關(guān)性ENKL p27蛋白低表達原因之一是由于EBV感染使UPS亢進加速其降解所致；(3)用EBNA1-shRNA抑制HANK1細胞EBNA1表達可下調(diào)UBEl基因表達，上調(diào)p27蛋白表達，細胞周期停滯，細胞生長受抑；EBNA1-shRN