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文檔簡介
1、目的:對(duì)血管形成進(jìn)行干涉是腫瘤臨床治療的有效手段。1997年,MichaelS.O'Reilly博士從腫瘤老鼠的尿中發(fā)現(xiàn)了Endostatin,命名為內(nèi)皮抑素。研究顯示內(nèi)皮抑素可多靶點(diǎn)發(fā)揮抗血管生成作用,從而導(dǎo)致腫瘤的休眠及退縮。.但內(nèi)皮抑素性質(zhì)不穩(wěn)定,易失活,難以大量制備;且需每日給藥,較為繁瑣。解決上述困難較好的辦法就是采取基因治療的方法。利用腺病毒載體介導(dǎo)內(nèi)皮抑素的方法成為了研究的熱點(diǎn)。為了保證腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素高效表達(dá),我們將
2、已構(gòu)建成功的人分泌性內(nèi)皮抑素腺病毒載體轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞,使其分泌有活性的內(nèi)皮抑素。體外實(shí)驗(yàn)表明感染重組腺病毒后的成纖維細(xì)胞表達(dá)分泌的內(nèi)皮抑素能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)的增殖。本研究的目的是(1)測定腺病毒介導(dǎo)的成纖維細(xì)胞體內(nèi)分泌內(nèi)皮抑素的水平;(2)觀察腺病毒介導(dǎo)的成纖維細(xì)胞分泌內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑對(duì)B16惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤生長的影響。 方法:(1)以表達(dá)人內(nèi)皮抑素的重組腺病毒感染成纖維細(xì)胞,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
3、對(duì)感染后的成纖維細(xì)胞體內(nèi)及體外分泌內(nèi)皮抑素的水平進(jìn)行測定。(2)用B16惡性黑色素瘤細(xì)胞株建立裸鼠的腫瘤移植模型,隨機(jī)分組并設(shè)立對(duì)照,分別予人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細(xì)胞、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒、順鉑、重組人內(nèi)皮抑素、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細(xì)胞聯(lián)合順鉑、重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑及轉(zhuǎn)染空載體的腺病毒感染的成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),計(jì)算腫瘤體積及抑瘤率,免疫組化法測微血管密度(MVD)及瘤體VEGF的表達(dá)。數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件
4、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:(1)注射人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染后的成纖維細(xì)胞24小時(shí)后,小鼠體內(nèi)的內(nèi)皮抑素水平即升至113.4ng/ml,直到第六天濃度恢復(fù)至注射前水平。(2)在裸鼠的惡性黑色素瘤移植模型上,與對(duì)照組的裸鼠比較,注射人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細(xì)胞組、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒組、順鉑組、重組人內(nèi)皮抑素組、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細(xì)胞聯(lián)合順鉑組及重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑組的抑瘤率分別為53.41%、35.06%、4
5、5.72%、17.52%、84.64%和59.40%,腫瘤的生長明顯受到抑制(p<0.05)。感染的成纖維細(xì)胞組腫瘤體積與重組腺病毒組、重組人內(nèi)皮抑素組相比減小(p<0.05)。各聯(lián)合組的腫瘤生長受抑與順鉑組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示對(duì)照組腫瘤的微血管密度及VEGF的表達(dá)最高,與其它各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),感染的成纖維細(xì)胞組腫瘤的微血管密度與重組腺病毒組、重組人內(nèi)皮抑素組相比降低(p<0.05).各
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