阿米替林對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響.pdf

1、神經(jīng)病理性疼痛是由于神經(jīng)系統(tǒng)病變引起的疼痛慢性狀態(tài)，還可伴有疼痛部位的感覺缺失、皮膚的自主神經(jīng)功能紊亂等癥狀。創(chuàng)傷、腫瘤、病毒感染、化療藥物、糖尿病、中風(fēng)、自身免疫性疾病等都可以引起神經(jīng)病理性疼痛。由于神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、疼痛程度重、治療效果差、療程長(zhǎng)，已成為困擾患者、影響生活質(zhì)量甚至造成個(gè)別患者厭世情緒的主要原因。近年來研究發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞參與疼痛調(diào)節(jié)和神經(jīng)信號(hào)傳遞處理、對(duì)腦的高級(jí)功能活動(dòng)具有重要作用。外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致的神經(jīng)病

2、理性疼痛模型伴有脊髓背角內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)激活。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，參與脊髓疼痛信息的傳遞。神經(jīng)損傷后，感覺傳入纖維谷氨酸和天冬氨酸釋放增加，過度激活中樞神經(jīng)谷氨酸受體，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元興奮性增加并激活膠質(zhì)細(xì)胞。突觸間隙內(nèi)谷氨酸的重?cái)z取主要依賴于星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的興奮性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(EAATs)，而EAATs表達(dá)在神經(jīng)損傷或其他致病因素影響下發(fā)生改變。 三環(huán)類抗抑郁藥是臨床上用于治療神經(jīng)性疼痛的一線

3、藥物，其鎮(zhèn)痛和抗抑郁機(jī)制是不同的。近來阿米替林藥理機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)阿米替林可以抑制脊髓內(nèi)谷氨酸濃度增高，增加阿片藥物耐受模型大鼠脊髓內(nèi)EAATs表達(dá)。我們推測(cè)，阿米替林改變膠質(zhì)細(xì)胞和EAATs功能和表達(dá)可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的另一條通路。研究神經(jīng)病理性疼痛模型使用阿米替林后膠質(zhì)細(xì)胞的改變可以進(jìn)一步闡明神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制，找出抗抑郁藥鎮(zhèn)痛作用新的作用靶點(diǎn)，為開發(fā)新的治療神經(jīng)病理性疼痛的抗抑郁藥物和設(shè)計(jì)藥物聯(lián)合使用方案提供依據(jù)。 主

4、要方法和技術(shù)路線： 1.取雄性SD大鼠制備坐骨神經(jīng)分支選擇結(jié)扎模型或行假手術(shù)，分為對(duì)照組(A)、SNI組(B)、AMI組(C)、SNI+AMI組(D)，經(jīng)腹腔分別給予0.2 ml生理鹽水(A、B)、10 mg/kg阿米替林(C、D)，每日2次。術(shù)后1、3、5d取L3～L6脊髓，分別進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞激活標(biāo)志物GFAP免疫熒光染色、Western blot和RT-PCR檢測(cè)，同時(shí)觀察機(jī)械痛閾值改變。 2.雄性SD大鼠隨機(jī)分為

5、4組：對(duì)照組(A)、SNI模型組(B)、AMI組(C)、SNI模型+AMI組(D)，經(jīng)腹腔注射0.2ml生理鹽水(A和B)、10mg/kg AMI(C和D)，每日兩次。術(shù)后1、3、5 d取各組大鼠L3～L6脊髓背角，檢測(cè)GLAST和GLT-1的蛋白和mRNA表達(dá)改變。 主要結(jié)果和結(jié)論： 1.與A組相比，B組大鼠機(jī)械痛閾值隨時(shí)間下降明顯(P<0.05)，右側(cè)脊髓背角呈形膠質(zhì)細(xì)胞也隨時(shí)間推移數(shù)量增多[86±20.1，187±

6、22.0，382±55.6(個(gè)/mm2)]，GFAP蛋白表達(dá)(0.38±0.241，0.84±0.306，1.36±0.433)和mRNA表達(dá)(0,55±0.135，0.86±0,163，1.32±0.317)隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)；C組各項(xiàng)指標(biāo)與A組比較無明顯差異；D組大鼠機(jī)械痛閾值給藥后3、5d停止下降[(4.5±1.50)g，(4.9±1.41)g]，右側(cè)脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多和胞體增大，但是術(shù)后5天細(xì)胞數(shù)量[216±44.6(個(gè)/

7、mm2)]不及B組大鼠，GFAP蛋白(0.79±0254，0.77±0.227)和mRNA(0.63±0.065，0,64±0.174)表達(dá)略增高，但不及B組(P<0.05)。上述結(jié)果提示，阿米替林可能通過抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，發(fā)揮治療神經(jīng)病理性疼痛作用。 2.對(duì)SNI大鼠脊髓背角EAATs表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，B組大鼠脊髓GLAST蛋白和mRNA表達(dá)先增加再降低，C組大鼠GLAST蛋白和mRNA表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加，D組大