GAD67與bNOS在GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球中的表達和共存研究.pdf

1、GAD67-GFP基因敲入小鼠作為模式實驗動物被廣泛應用于生物醫(yī)學實驗中，尤其是在探測GAD67靈敏性方面優(yōu)勢尤為突出，因此GAD67-GFP基因敲入小鼠經(jīng)常被用于GAD67相關神經(jīng)元-γ氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元的相關研究中。GABA是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質，已有研究在嗅球各細胞層中均有GABA的分布。為了更精確的研究GABA在嗅球中的分布我們引入了GAD67-GFP基因敲入小鼠作為實驗動物模型。一氧化氮(NO)也是一種重要的神經(jīng)

2、遞質。已有研究表明在嗅皮質區(qū)，NO與GABA存在著共定位，而且二者在激活NMDA受體通路中存在著協(xié)同作用。然而在嗅球中還缺乏相關方面的研究。
　　 本實驗首先通過對動物基因組進行PCR擴增，對小鼠進行基因型鑒定。取經(jīng)基因型鑒定為陽性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰凍切片。尼氏染色(Nisslstaining)顯示嗅球各細胞層排布分層。GAD67-GFP與DAPI雙染探查嗅球中各細胞層中GAD67陽性神經(jīng)元的分布比例。免疫熒

3、光雙標實驗，探查GAD67-GFP與一氧化氮合酶(bNOS)在嗅球各細胞層的分布及共存情況。
　　 基因組PCR基因型鑒定表明陽性GAD67-GFP基因敲入小鼠基因組中含有GFP片段即瓊脂糖凝膠電泳中出現(xiàn)750bp條帶。Nissl染色結果清楚地顯示嗅球共有三個細胞層即由表及里依次為：球旁細胞曾(GL)、僧帽細胞層(MCL)、顆粒細胞層(GCL)。GAD67-GFP與DAPI雙染結果顯示GAD67-GFP在嗅球各細胞層的分布比例分