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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文攜帶GAD67基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細(xì)胞的研究姓名：謝三平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：陳吉相201005華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3染大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞，觀察其轉(zhuǎn)染效果及轉(zhuǎn)染后GAD67基因在骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。[方法方法]利用基因重組技術(shù)，用NotI、SpeI分別對(duì)pCMV6XL5GAD67質(zhì)粒進(jìn)行酶切獲得GAD67基因片段，然后將其插入pDC316CMVEGF
2、P質(zhì)粒構(gòu)建pDC316CMVEGFPGAD67真核表達(dá)載體，經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定正確；通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)利用脂質(zhì)體將其導(dǎo)入通過(guò)貼壁方法分離培養(yǎng)出來(lái)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察、流式細(xì)胞儀檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率，免疫組化檢測(cè)GAD67基因的表達(dá)。[結(jié)果結(jié)果]經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定證實(shí)成功構(gòu)建pDC316CMVEGFPGAD67真核表達(dá)載體，其中插入有3.5kbp的人類(lèi)GAD67cDNA，轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細(xì)胞后熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)大量帶綠色熒光的細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞
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