CD14基因多態(tài)性與嚴(yán)重?zé)齻颊呒?xì)胞免疫功能改變的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：有資料提示，基因多態(tài)性可能與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展有著內(nèi)在的聯(lián)系。本前瞻性研究通過(guò)對(duì)嚴(yán)重?zé)齻颊逤D14基因啟動(dòng)子-159位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，初步探討其基因多態(tài)性與患者嚴(yán)重感染并發(fā)癥（包括膿毒癥及MODS）的關(guān)系，進(jìn)一步分析不同基因多態(tài)性對(duì)嚴(yán)重?zé)齻蠹?xì)胞免疫功能改變及晚期炎性介質(zhì)產(chǎn)生的影響，并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行探討。通過(guò)該臨床前瞻性研究，旨在為大面積燒傷后嚴(yán)重感染并發(fā)癥的預(yù)警與防治提供新線索。
　　方法：（1）采集77例燒傷體表

2、總面積大于30％患者血標(biāo)本，通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性方法檢測(cè)CD14-159C/T基因多態(tài)性，動(dòng)態(tài)觀察傷后1、3、5、7、14、21、28天患者T淋巴細(xì)胞、CD14+單核細(xì)胞免疫功能的改變，并與不同基因型進(jìn)行比較分析。采用MTT方法檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血漿sCD14及淋巴細(xì)胞上清液IL-2濃度、RT-PCR方法分析CD14mRNA表達(dá)；并應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+比值、CD

3、4+淋巴細(xì)胞凋亡率和CD14+單核細(xì)胞表面HLA-DR定量表達(dá)（使用QuantiBRITETM抗HLA-DRPE*/抗MonocytePerCP-Cy5.5單克隆抗體）。（2）收集35例燒傷體表總面積大于30％患者血標(biāo)本，對(duì)不同CD14基因多態(tài)性患者分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、RT-PCR方法檢測(cè)HMGB1含量及HMGB1mRNA表達(dá)，進(jìn)一步分析HMGB1含量與細(xì)胞免疫指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：（1）通過(guò)對(duì)77例嚴(yán)重?zé)齻颊逤D14

4、分子的基因型檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CC型發(fā)生膿毒癥的幾率（42.9％）較TC（77.6％）、TT（71.4％）型低。其中3例CC純合子膿毒癥患者中，僅1例出現(xiàn)MODS；38例TC雜合子膿毒癥患者19例出現(xiàn)MODS（50％）；而15例TT純合子膿毒癥患者10例出現(xiàn)MODS（66.7％）。（2）在三種基因型患者中，傷后7～21天TT純合子與TC雜合子白細(xì)胞中CD14mRNA表達(dá)明顯高于純合子CC，三種基因型之間CD14mRNA表達(dá)顯著不同（P<0.05

5、或P<0.01），而TT與TC基因型之間差異不明顯。同樣，燒傷后TC、TT基因患者血漿中sCD14濃度較高，其傷后第5天CC基因型血漿sCD14水平顯著低于TC基因型（P<0.01）。（3）燒傷后攜帶TC、TT型患者T淋巴細(xì)胞IL-2產(chǎn)生、T淋巴細(xì)胞增殖能力一直處于較低水平，而CC型在傷后14天逐漸上升。與CC型患者比較，攜帶TT、TC型患者T淋巴細(xì)胞比值普遍降低，尤其在傷后第1、3、14、21、28天差異明顯（P<0.01）。TT、T

6、C型患者CD3+CD4+T細(xì)胞凋亡率均較高，TT型患者傷后第5、7、21天凋亡率顯著高于CC型患者（P<0.05），TC型患者傷后7、14天其凋亡率高于CC型患者（P<0.05）。進(jìn)一步分析可見(jiàn)，傷后第3、14、21天CC純合子患者HLA-DR表達(dá)量均明顯高于TT純合子（P<0.05），而與TC型比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。（4）TT、TC型患者血漿中HMGB1的含量傷后14、21、28天均顯著高于CC純合子（P<0.05）；而

7、傷后14天攜帶TT、TC基因型HMGB1mRNA表達(dá)與CC基因型存在顯著差異（P<0.05），其他時(shí)間則無(wú)明顯差異。（5）血漿中HMGB1含量與T淋巴細(xì)胞增殖活性、IL-2水平、CD4+/CD8+比值、單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)量呈一定程度負(fù)相關(guān)（P<0.05或P<0.01），而與CD4+凋亡率、sCD14含量呈正相關(guān)（P<0.05或P<0.01）。
　　結(jié)論：（1）大面積燒傷后CD14基因啟動(dòng)子-159位點(diǎn)多態(tài)性TT基因型可能是燒