人小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞、上皮祖細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定及體內(nèi)外成肝誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：B2011004005人小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞、上皮祖細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定及體內(nèi)外成肝誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究BiologicalCharacteristicsIdentificationandinvitro／invivoHepatogenicDifferentiationofHumanMinorSalivaryGland—DerivedMesenchymalStemCellsandEpithelialProgen

2、itorCells所院：姓名：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專業(yè)：整形外科醫(yī)院李艷趙振民趙振民楊明勇王連召外科學(xué)研究方向：成體干細(xì)胞完成日期：2014年3月1人小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞、上皮祖細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定及體內(nèi)外成肝誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的1對(duì)小涎腺組織分別進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞方向培養(yǎng)和上皮祖細(xì)胞方向培養(yǎng)；在先前研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入鑒定小涎腺兩種類型干細(xì)胞表型；對(duì)兩種細(xì)胞的生物學(xué)特性如生長曲線、倍增時(shí)間、克隆形成率等進(jìn)行檢測，分析其干細(xì)胞增殖

3、潛能；選用2D平面培養(yǎng)和3Dmatrigel培養(yǎng)兩種誘導(dǎo)方案，對(duì)兩種類型細(xì)胞分別進(jìn)行2D及3D成肝誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，探索小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞(MinorSalivaryGlandderivedMesenchymalStemCells，MSGMSCs)及上皮祖細(xì)胞(MinorSalivaryGlandderivedEpithelialProgenitorCells，MSGEpiPCs)體外成肝誘導(dǎo)方法，分析確定其成肝分化潛能。2建立小鼠213肝

4、大部分切除損傷模型，設(shè)立對(duì)照組；對(duì)小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞和上皮祖細(xì)胞進(jìn)行CMDil熒光標(biāo)記示蹤；分別移植小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞及上皮祖細(xì)胞到小鼠肝損傷模型，評(píng)估移植細(xì)胞在肝損傷模型中的分布及轉(zhuǎn)化，探討這兩種類型細(xì)胞在體內(nèi)成肝的可能性。方法1對(duì)小涎腺組織進(jìn)行免疫熒光鑒定，分析從小涎腺組織中獲得干細(xì)胞的可能性；通過組織塊培養(yǎng)法從人小涎腺組織中培養(yǎng)間充質(zhì)千細(xì)胞及上皮祖細(xì)胞，進(jìn)行純化擴(kuò)增；利用免疫熒光、流式細(xì)胞儀等對(duì)獲得的細(xì)胞進(jìn)行表型鑒定；檢測克隆形成

5、率、生長曲線及倍增時(shí)間，對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨成軟骨成脂分化誘導(dǎo)，研究兩種細(xì)胞的生物學(xué)特性。QPCR檢測干細(xì)胞及成肝相關(guān)基因的表達(dá)情況，并與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行比較，深入探討細(xì)胞的干細(xì)胞特征及成肝分化的可能性。2分別對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行體b2D及3D成肝分化誘導(dǎo)，觀察細(xì)胞生長及形態(tài)的變化，通過免疫熒光、吲哚青綠ICG攝取及QPCR檢測不同誘導(dǎo)條件下的成肝分化情況。3對(duì)小涎腺間充質(zhì)干細(xì)胞和上皮祖細(xì)胞進(jìn)行CMDil熒光標(biāo)記；建立小鼠2／3肝大部分