小鼠骨髓間充質干細胞體外誘導成肝樣細胞的實驗研究.pdf

1、目的：體外分離、培養(yǎng)、擴增、鑒定小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)；體外誘導小鼠BMSCs定向分化為肝樣細胞，提高分化效能。 方法：分離C57小鼠的BMSCs，觀察其形態(tài)學變化。FACS檢測CD34、CD105，體外誘導BMSCs向骨、脂肪、軟骨細胞分化。P1BMSCs加以HGF、FGF4、EGF、OSM為主要誘導因子的誘導液成肝樣細胞誘導為實驗組；對照組加基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)。相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，并分別于培養(yǎng)第7、14、21

2、天：免疫組化檢測ALB的蛋白質合成；RT-PCR檢測aFP、ALB、CK18、TAT和CYP2b9的mRNA表達； FACS測定ALB和CK18蛋白標記的陽性率。 結果：BMSCs貼壁生長，呈長梭形。FACS檢測P1 BMSCs CD34陰性、CD105陽性；BMSCs成骨誘導檢測鈣結節(jié)、AKP、OCN陽性；成脂肪誘導細胞油紅O染色陽性；成軟骨表達誘導Ⅱ型膠原。誘導組在培養(yǎng)第14天細胞分布呈典型的鋪路石狀；對照組細胞為長梭形。在

3、培養(yǎng)的第7、14、21天，誘導組細胞ALB免疫組化染色和aFP、ALB、CK18的mRNA檢測均為陽性；第14、21天，細胞表達TAT、CYP2b9mRNA；對照組除aFP的mRNA呈弱陽性外，其余均為陰性。第7、14、21天，誘導組FACS檢測CK18蛋白的陽性率分別為(71.42±4.98)％、(75.88±2.23)％、(80.58±2.14)％；ALB蛋白的陽性率分別為(74.98±3.28)％、(79.69±2.99)％、(8