IL1B rs16944基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、前言
　　糖尿病(DM)已發(fā)展成為全球性的健康問(wèn)題，根據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟(IDF)統(tǒng)計(jì)，2000年全球DM患者為1.51億，而目前已達(dá)2.85億，按照目前的速度增長(zhǎng)，估計(jì)到2030年全球?qū)⒂薪?億人患有DM。DM因其嚴(yán)重影響人類的健康而引起世界范圍內(nèi)學(xué)者的關(guān)注。目前的研究表明，白介素1B(IL1B)基因家族的遺傳變異與血糖穩(wěn)態(tài)及2型糖尿病(T2DM)的發(fā)展有關(guān)。本文利用提取基因組DNA及MassARRAY分子量陣列技術(shù)對(duì)遼寧地區(qū)漢族

2、健康人群及T2DM人群IL1Brs16944進(jìn)行基因多態(tài)性分析，以探討IL1Brs16944基因多態(tài)性與T2DM的關(guān)系。
　　研究方法
　　一、研究對(duì)象的選擇及入選標(biāo)準(zhǔn)
　?。ㄒ唬┎±M的選擇
　　選取中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院內(nèi)分泌科2012年10月至2013年6月住院的T2DM患者583人，均為漢族，其中男290人，女293人，年齡（58±21）歲，病史在1-20年之間，符合1999年WHO糖尿病專家委員會(huì)提出

3、的診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)根據(jù)既往病史、家族史及實(shí)驗(yàn)室檢查，排除同時(shí)合并有垂體瘤、原發(fā)性甲狀腺功能亢進(jìn)癥等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，或患有各種內(nèi)科急、重癥，或進(jìn)行過(guò)胃空腸吻合術(shù)等易引起血糖變化等手術(shù)的患者。
　?。ǘ?duì)照組的選擇
　　以2012年10月至2013年6月本院體檢者正常漢族對(duì)象366人為對(duì)照組，其中男179人，女187人，年齡（56±19）歲，兩組對(duì)象年齡、男女比例無(wú)顯著性差異（P＞0.05），除外DM及心、肝、腎等疾患。以

4、上試驗(yàn)對(duì)象均無(wú)血緣關(guān)系。
　　二、實(shí)驗(yàn)方法
　　兩組對(duì)象于晨空腹留取依他酸抗凝血2毫升，同時(shí)記錄其年齡、性別、身高、體重、血壓等基本臨床指標(biāo)，在OlympusAU2700全自動(dòng)分析儀上酶法測(cè)定血糖、總膽固醇、甘油三酯，直接法測(cè)定低密度脂蛋白、高密度脂蛋白，在TOSOH全自動(dòng)分析儀上液相層析法測(cè)定糖化血紅蛋白，在Elecsys2010全自動(dòng)分析儀上電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定胰島素及C肽水平，以上檢驗(yàn)結(jié)果均選用高、中、低3種質(zhì)控樣品進(jìn)行質(zhì)

5、控分析。
　　提取留取血樣DNA，試劑盒為寶生物工程（大連）有限公司生產(chǎn)的TaKaRa9450，并用紫外分光光度法對(duì)提取的DNA進(jìn)行濃度及純度測(cè)定，其濃度和純度應(yīng)達(dá)到要求（(DNA濃度＞10ng/μl，純度OD260/280為1.6～2.0)。
　　MassARRAY分子量陣列技術(shù)進(jìn)行基因分型，送上海醫(yī)藥臨床研究中心檢定。
　　三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　運(yùn)用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算各組基因頻率和等位基因頻率，然后用Hardy-W

6、einberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)確認(rèn)研究樣本的群體代表性。用SPSS19.0軟件包進(jìn)行分析，組間計(jì)量指標(biāo)比較采用t檢驗(yàn)，組間基因頻率比較采用卡方檢驗(yàn)，樣本群體代表性采用吻合度檢驗(yàn)法計(jì)算兩組X2值。對(duì)照組及病例組不同基因型間臨床參數(shù)比較采用單因素方差分析。
　　研究結(jié)果
　　一、兩組對(duì)象一般資料比較
　　病例組體質(zhì)量指數(shù)(BMI)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，說(shuō)明T2DM患者的肥胖較明顯。病例組收縮壓、舒張壓均較對(duì)照組增

7、高(P＜0.05)，說(shuō)明T2DM患者更易患有高血壓?。ㄒ?jiàn)表1）。
　　表1，兩組對(duì)象一般資料比較（(x)±s）┏━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━┳━━━━━┓┃分組┃例數(shù)┃BMI(kg/m2)┃SBP(mmHg)┃DBP┃(mmHg)┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃病例組┃583┃25.72±3.85┃135.78±18.19┃83.2┃1±1

8、0.63┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃對(duì)照組┃366┃23.94±3.41┃126.72±15.16┃76.7┃1±11.07┃┗━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━┻━━━━━┛
　　二、兩組對(duì)象IL1Brs16944基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果
　　IL1Brs16944基因共發(fā)現(xiàn)AA、AG、GG三種基因型，基因分型以AG雜合子分布最多，純合子A

9、A及GG其基因頻率分布接近，兩組對(duì)象各基因型分布無(wú)顯著性差異(X2=0.025，P=0.746)，其等位基因分布亦無(wú)顯著性差異(X2=0.572，P=0.449)（見(jiàn)表2）。根據(jù)兩組X2值，其自由度為2，P值均＞0.05，顯示兩組人群基因頻率符合遺傳平衡法則，具有群體代表性。
　　表2，兩組對(duì)象IL1Brs16944基因多態(tài)性分布[n/(％)]┏━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━

10、━━━━━━┓┃┃┃基因型頻率┃┃等位基因頻率┃┃分組┃例數(shù)┃┃┃┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━━━┫┃┃AA┃AG┃GG┃A┃G┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━┫┃病例組┃583120(20.58％)┃292(50.09％)┃171(29.33％)┃532(45.63％)┃634(54.37％)┃┣

11、━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━┫┃對(duì)照組┃36682(22.40％)┃183(50.00％)┃101(27.60％)┃347(47.40％)┃385(52.60％)┃┗━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━┛
　　三、兩組對(duì)象各基因型間臨床參數(shù)水平比較
　　對(duì)照組各基因型間的BMI、空腹血糖、血脂（

12、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白）無(wú)顯著性差異(P＞0.05);病例組各基因型間的BMI、血脂（甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白）、各時(shí)間段的血糖、胰島素及C肽水平（0分、60分、120分、180分）、HOMA-IR值、HOMAbeta值、糖化血紅蛋白同樣無(wú)顯著性差異（P＞0.05）（見(jiàn)表3-6，各臨床參數(shù)取95％可信區(qū)間）。
　　表3，病例組各基因型間臨床參數(shù)比較1（(x)±s）┏━━━━┳━━━━━

13、━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┓┃分組┃糖化血紅蛋白(％)┃空腹血糖(mmol/L)┃60分血糖(mmol/L)┃120分血糖(mmol/L)┃180分血糖(mmol/L)┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃AA┃8.87±0.54┃11.92±1.65┃18.33±2.16┃18.79±

14、2.23┃15.37±2.76┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃AG┃9.69±1.00┃12.34±0.96┃19.08±1.65┃20.45±2.97┃15.08±1.53┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃GG┃8.76±0.45┃11.81±1.32┃18.

15、48±1.32┃19.31±1.73┃14.78±1.88┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃F┃1.23┃0.24┃0.21┃0.69┃1.60┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━━┻━━━━━

16、━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┛
　　表4，病例組各基因型間臨床參數(shù)比較2（(x)±s）┏━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃分組┃甘油三酯(mmol/L)┃低密度脂蛋白(mmol/L)┃高密度脂蛋白(mmol/L)┃總膽固醇(mmol/L)┃BMI(kg/m2)┃┣━━━━╋━━

17、━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AA┃2.36±0.55┃3.12±0.22┃18.33±2.16┃5.19±0.31┃25.88±0.87┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AG┃2.21±0.25┃3.12±0.13┃19.08±1.65┃5.11±0.18┃25.

18、29±0.57┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃GG┃2.37±0.47┃3.23±0.20┃18.48±1.32┃5.25±0.30┃26.02±0.87┃┣━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃F┃0.13┃0.52┃0.23┃0.38┃1.26┃┣━━━

19、━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━┛
　　表5，病例組各基因型間臨床參數(shù)比較3（(x)±s）┏━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━

20、┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃分組┃胰島素0分(μU/ml)┃胰島素60分(μU/ml)┃胰島素120分(μU/ml)┃胰島素180分(μU/ml)┃HOMA-IR┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AA┃11.48±5.56┃37.12±15.91┃9.97±18.79┃34.68±21.77┃4.79±0.94┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋

21、━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃AG┃11.26±1.96┃30.33±4.09┃33.53±4.71┃23.37±3.63┃4.79±0.72┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃GG┃12.76±3.93┃31.81±5.80┃33.13±5.83┃24.66±6.44┃4.90±1.05┃┣━━━╋━━

22、━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃F┃0.25┃0.78┃0.62┃1.57┃0.02┃┣━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━━

23、━┛
　　表6，病例組各基因型間臨床參數(shù)比較4（(x)±s）┏━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━┓┃分組┃C肽0分(ng/ml)┃C肽60分(ng/ml)┃C肽120分(ng/ml)┃C肽180分(ng/ml)┃HOMAbeta┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃AA┃2.46±0.28┃4.87±0.73┃6

24、.54±0.95┃5.97±0.75┃42.99±20.82┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃AG┃2.62±0.20┃5.08±0.43┃6.45±0.53┃5.61±0.44┃38.88±10.01┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃GG┃2.56±0.27┃5.17±0.58┃6.59±0.72┃5.4

25、7±0.59┃42.24±12.50┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃F┃0.35┃0.20┃0.05┃0.55┃0.12┃┣━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━┫┃P┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃＞0.05┃┗━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━